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谷物食品的丁基化羟基茴香醚和丁基化羟基甲苯
食品添加剂：直接法
- 气相色谱法
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A 原理
以CS2提取早餐谷物食品中的BHA和BHT，用火焰离子化检测器进行GC测定。
B 仪器
B.a 气相色谱仪
带氢火焰离子化检测器。操作条件：温度〔℃〕－柱子160，检测器210，闪蒸加热器200；氮气流速，能在3－4min内从QF-1柱洗脱BHT，及在3－4min内从Apiezon柱洗脱BHA；氢气流速，对Apiezon柱，约为40ml/min，对QF-1柱约为25ml/min；空白流速约为340ml/min；静电计灵敏度，500×〔满量程偏转为5×10^-10^A〕带有1mV记录仪。如有必要可调节氢气和空气流速。交替调节，使静电计灵敏度达到0.1μgBHA给出约50%满量程偏转。重复进样，直到连续几次进样同样体积的标准混合物的峰高保持不变为止。$$从Apiezon柱(1.2m)洗脱的顺序是：BHA，BHT，di-BHA。从QF-1柱(1.8m)洗脱的顺序是：BHT，BHA，di-BHA。$$使用2根GC柱鉴别BHA和BHT。使用Apiezon L/Gas-ChromQ的1.2m长柱子可分离BHA的2-和3-同分异构体。调节GC参数可使用BHA的同分异构体很好地分离，譬如调节柱温到150℃及静电计灵敏度到1000×。调节BHA标准品进样量到给出50%的偏转。
B.b GC柱
玻璃柱，1.2m×4mm和1.8m×4mm，分别填充以涂有Apiezon L和QF-1硅油的80－100目筛的Gas-Chrom Q。制备柱子和材料时，要仔细用二氯二甲基硅烷溶液清洗柱子的内壁和少量的细玻璃毛，再用MeOH淋洗并干燥〔注意：二氯二甲基硅烷有毒，要避免与皮肤和眼睛接触，使用高效的除烟雾装置〕。$$慢慢地一点一点地取50g Gas-Chrom Q加到几乎装满CCl4的800ml烧杯里。用真空管路和阱除去留在溶液表面的细颗粒。倾析去溶剂并干燥GC载体。$$取20.0g干燥过的 Gas-Chrom Q放入500ml圆底烧瓶中，加入100mlCHCl3或CH2Cl2，慢慢混合。溶解1g Apiezon L或2.0gQF-1于50mlCHCl3或CH2Cl2中，加入到烧瓶里，慢慢混合。用真空旋转蒸发器和水浴蒸发至干〔对CH2Cl2用35℃，对CHCl3用70℃〕。$$用细玻璃毛塞和带孔眼的隔膜小心塞柱柱子的出口。从出口处抽真空，慢慢从进样部位加入涂好的载体轻轻敲打以填实。填充到闪蒸加热器的加热区的1cm以内的地方，用细玻璃毛塞住，在200℃用慢速氮气流〔约10ml/min〕老化3天左右，或者老化到基线稳定为止。
B.c 色谱管
带有一个小滴管尖〔6mm直径×50mm长〕的25×200mm玻璃管，带有或不带有中孔度烧结玻璃盘，附有填实柱子用的敲击棒。
B.d 细玻璃毛
用CS2洗涤并且干燥。
C 试剂
C.a CS2
试剂级；几乎无色。如果有明显黄色，使用前要蒸馏一下。
C.b BHA，BHT和di-BHA标准品的混合物
内含有BHA，BHT和di-BHA各0.02μg/μl的CS2溶液。将BHA，BHT各1.00mg溶解于少量的CS2内，加入10.0ml内标溶液，用CS2稀释至50ml。或者用CS2稀释更浓的溶液来制备。配制新鲜的溶液并存放在弱光化作用的玻璃器皿内。
C.c 内标溶液
0.1μgdi-BHA/μl的CS2溶液。新鲜配制并存放于弱光化作用的玻璃器皿内中。
C.d 二氯二甲基硅烷溶液
取二氯二甲基硅烷5ml用甲苯稀释到100ml。
D 测定
〔所有溶液要避光保存，需在一天之内完成测试。可使用任一种GC柱进行分析。〕$$研磨样品到能通过20号筛，混匀〔必要时，磨碎了的样品可以在氮气保护下冷冻贮藏几天。〕如有必要，置细玻璃毛塞于色谱管底部，将20.0g样品加到柱内，在不加溶剂时用敲击棒填实，在柱顶加入另一个小玻璃毛塞，推进柱子。在100ml烧杯上的50ml处作一个标记，将烧杯放在柱子收集淋洗液。加3份5ml一份CS2到柱内，在加下一份时让前一份渗进柱内。CS2淋洗液的速度约为5ml/min。如有必要，可使用氮气以保持流速。$$向柱内加入几份10ml CS2，让每份都渗入柱内，直到收集到50ml淋洗液。用少量CS2清洗柱尖。准确加入di-BHA到淋洗液里使溶液蒸发后得到的浓溶液为0.02μgdi-BHA/μl。室温下于通风橱中以缓慢的氮气流蒸发淋洗液到小体积〔小于5.0ml〕。精确稀释已蒸发过的样品到适当体积〔例如5.0ml〕以用于GC分析。用10μl进样器进样3.0－9.0μl样品到气相色谱仪中，在每个系列样品的进样前后，进样3.0－9.0μl混合标准溶液。用标准品的平均测量值进行计算。以mm为单位测量每个峰的峰高。〔BHA，BHT和di-BHA峰的高度应在满量程偏转的30－95%范围以内。〕$$抗氧剂的含量〔ppm〕用内标法校准如下：$$ ppmBHA或BHT＝(H/H')×(C/C')×(H'^^I^^/H^^I^^〕×(C^^I^^/C'^^I^^)$$式中，H和H'分别表示样品和标准品的峰高(mm)；C和C'分别表示样品(g/μl)和标准溶液的浓度(μg/μl)；C^^I^^和C'^^I^^分别表示样品中内标和标准溶液的浓度(μg/μl)。
