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食品中的苯甲酸和山梨酸
食品添加剂：直接法
- 气相色谱法
- 〔联合测试苹果汁、杏仁酱和鱼酱(0.5－2g/kg水平〕，具有代表性的富含碳水化合物的浆状物、富含脂肪和碳水化合物以及富含蛋白质的食品〕。
A 原理
苯甲酸和山梨酸用乙醚提取，并且接着在NaOH水溶液和CH2Cl2中进行分配。酸从食品中分离出来，并转变成三甲基硅〔TMS〕酯，用GC测定。苯乙酸和已酸分别用作苯甲酸和山梨酸的内标。
B 仪器
B.a 气相色谱仪
使用线性程序升温炉，火焰离子化检测器和记录仪。可采用下列条件：色谱柱，1.8m×2mm〔内径〕填上涂有3%OV-1的100－120目Varaport30载体的螺旋状玻璃管。操作温度：炉温80－120℃，8℃/min；进样室200℃，检测器280℃。氮载气流速20ml/min。已酸、山梨酸、苯甲酸和苯乙酸的近似保留时间分别为2.5，4，5和6min。
B.b 离心机
带30ml和200ml的离心瓶。
B.c 机械振荡器
Bulher SM-B或同类产品。
C 试剂
在全部分析中使用分析纯试剂。
C.a 内标溶液
将250mg苯乙酸和250mg已酸溶解于100ml3%KOH水溶液中。
C.b 硅烷化试剂
N-甲基-N-三甲基硅烷-三氟乙酰胺〔MSTFA〕。
C.c 标准溶液
分别按下述浓度用CHCl3配制苯甲酸、山梨酸、苯乙酸和已酸的混合标准溶液：1) 200，200，750和750μg/ml $$ 2) 400，400，750和750μg/ml $$ 3) 600，600，750和750μg/ml $$ 4) 800，800，750和750μg/ml $$ 5) 1000，1000，750和750μg/ml
D 样品的制备
在机械混合器中将样品混匀。如果由于样品很稠而很难混匀，可以用其它任何技术以确保样品均匀。
E 提取
E.a 一般方法
准确称取5.0g混匀的样品，放进带有聚四氟乙烯衬螺帽的30ml离心管中。加入3.00ml内标液，1.5ml H2SO4(1+5)，5g沙子和15ml乙醚。拧紧螺帽，不能泄漏。机械振荡5min，然后在1500×g条件下离心10min。用移液管将乙醚层移到250ml分液漏斗中，每次用15ml乙醚，重复提取2次。$$每次用15ml 0.5N NaOH和10ml饱和的NaCl溶液提取2次合并后的乙醚相。收集水层，放入250ml分液漏斗中，加入2滴甲基橙，用HCl(1+1)酸化溶液到pH＝1。分别用75，50和50ml的CH2Cl2连续提取。如果发生乳化，则加入10mlNaCl饱和溶液。通过装有15g无水Na2SO4的过滤器倾析CH2Cl2提取液到250ml圆底烧瓶中，用旋转蒸发器于40℃蒸发CH2Cl2溶液至刚干。
E.b 奶酪和糊状粘稠的食品
准确称取5.0g混匀的样品，放进带有聚四氟乙烯衬螺帽的30ml离心管中。加入3.00ml内标液，1.5ml H2SO4(1+5)，5g沙子和15ml乙醚。拧紧螺帽，不能泄漏。机械振荡5min，然后在1500×g条件下离心10min。用移液管将乙醚层移到250ml分液漏斗中，每次用15ml乙醚，重复提取2次。$$每次用15ml 0.5N NaOH和10ml饱和的NaCl溶液提取2次合并后的乙醚相。收集水层，放入250ml分液漏斗中，加入2滴甲基橙，用HCl(1+1)酸化溶液到pH＝1。分别用75，50和50ml的CH2Cl2连续提取。如果发生乳化，则加入10mlNaCl饱和溶液。通过装有15g无水Na2SO4的过滤器倾析CH2Cl2提取液到250ml圆底烧瓶中，用旋转蒸发器于40℃蒸发CH2Cl2溶液至刚干。
F 衍生化气相色谱
将10.0mlCHCl3加到盛有残渣的250ml圆底烧瓶内。塞紧，用手摇2min。移取1.00ml CHCl3溶液到8ml带聚四氟乙烯衬的螺帽的试管中，加入0.20ml硅烷化试剂。盖好，在60℃烘箱内或水浴上放置15min。重复进样1μl样品液到气相色谱仪内，当溶剂峰出现时，开始程序升温。测量峰高和计算苯甲酸/苯乙酸及山梨酸/已酸的峰高比。重复测定的峰高比使用平均值。重复进样的峰高比的差值应小于等于5%。
G 标准曲线的制备
