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牛肉末中的防腐剂
食品添加剂：直接法
- 分光光度法
- 〔适用于牛肉末里的抗坏血酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐和亚硫酸盐〕
A 试剂
A.a 对品红酸性溶液
将100mg对品红氯化物和200ml水放入1L容量瓶内。加入160ml HCl(1+1)并稀释至刻度。在使用前放置12h。
A.b 四氯合汞酸钠溶液
溶解4.7gNaCl和10.9gHgCl2于约1900ml水中，用水稀释至2L。
A.c 甲醛溶液
15mg/100ml。2ml福尔马林用水稀释到100ml。取出2ml进一步用水稀释至100ml。
A.d 亚硫酸钠溶液
1mg/ml。将100mg Na2SO3溶解于100ml四氟合汞酸钠溶液中。
A.e 抗坏血酸溶液
1mg/ml。将100mg USP抗坏血酸溶于100ml水中。应在使用前配制。
A.f 乙酸-偏磷酸溶液
10g HPO3片溶解于HOAc(1+1)中，用HOAc(1+1)稀释至100ml。
A.g 靛酚标准溶液
25μg/ml。将50mg2，6-二氯靛酚钠盐溶解于50ml含有42mgNaHCO3的水中。剧烈振动，用水稀释到200ml。通过带槽纹的滤纸过滤，放在琥珀色具玻璃塞瓶内于冰箱中保存。$$按下述方法标定：移取三份2.0ml的抗坏血酸溶液(e)，分别放入盛有0.4ml混合酸溶液(f)和23ml水的3个50ml锥形瓶中。用25ml靛酚标准溶液快速滴定到从桃红－紫红终点，稳定10s。〔每次滴定约需要15ml靛酚溶液，读数应精确到0.1ml〕。靛酚的浓度用抗坏血酸的毫克数/ml表示。每天对新配制的抗坏血酸溶液进行标定。
A.h 苯甲酸钠溶液
2mg/ml。将200mg苯甲酸钠溶解于100ml水中。
A.I 山梨酸钾溶液
1mg/ml。将100mg山梨酸钾溶解于100ml水中。
B 亚硫酸盐标准曲线的制备
用移液管取0，1，2，3，4，5和6mlNa2SO3溶液分别放入7个100ml容量瓶中。向每个瓶中加入50ml四氯合汞酸钠溶液并用水稀释至刻度。从每个容量瓶中取1.0ml溶液分别放到200mm试管。加入5.0ml品红溶液，混合，加入10mlCH2O溶液，混匀，放置30min。在550nm处以0ml标准溶液为参比测定吸光度A。以A对mgNa2SO3/ml〔分别为0.01-0.06mg/ml〕作图。
C 苯甲酸和山梨酸标准曲线的制备
用移液管吸取1，2，3，4，5和6ml苯甲酸钠溶液分别放入6个100ml容量瓶中。用水稀释至刻度。从每个容量瓶中分别移取5ml溶液放入6个50ml具玻璃塞量筒中。加入0.4ml HCl(1+1)和石油醚到50ml刻线处。塞住，振荡1min。用5ml水制备空白。在记录式分光光度计上从300到200nm扫描提取液。在约225nm最大吸收处读出吸光度A，减去空白。然后以△A对mg苯甲酸钠/5ml〔分别为0.1－0.6mg〕作图。$$用相似的方法制备山梨酸钾的标准曲线。以在约250nm处最大吸收的△A对mg山梨酸钾/5ml〔分别为0.05－0.3mg〕作图。
D 样品溶液的配制
称取20g牛肉末放入200ml烧杯，加入85ml水，用玻璃棒搅拌并混匀，放置10min，放置时间不要太长。将溶液通过放有松玻璃毛塞的漏斗倾到第二个烧杯里。立刻取下5ml溶液进行亚硫酸盐的测定。要保证提取液体积是100ml〔加入的85ml水+由牛肉得到的液体〕。
E 测定
E.a 亚硫酸盐
吸取5ml滤过的提取液，放入盛有5.0ml四氯合汞酸钠溶液的200mm试管中，混合。转移1ml稀溶液到第二个200mm试管中，加入5mlp-蔷薇苯胺〔对品红〕溶液，混合。加入10.0mlCH2O溶液，混合，放置30min。如果出现紫红色，用玻璃纤维过滤器过滤，按标准曲线的制备方法测定吸光度A。1ml试液代表0.1g肉，所以每0.01mg相当于0.01%的Na2SO3。如果颜色太深，可用四氯合汞酸钠溶液进一步稀释原试管中的溶液。
E.b 苯甲酸盐
吸取5ml滤过的提取液放入50ml具玻璃塞的量筒中，按C中制备标准曲线的步骤操作。从300到200nm扫描溶液。如果有苯甲酸盐存在，在约225nm处有峰出现，用标准曲线进行定量。5ml试液代表1g肉，所以每0.1mg相当于0.01%苯甲酸钠。
E.c 山梨酸盐
吸取5ml滤过的提取液放入50ml具玻璃塞的量筒中，按C中制备标准曲线的步骤操作。从300到200nm扫描溶液。如果有苯甲酸盐存在，在约225nm处有峰出现，用标准曲线进行定量。5ml试液代表1g肉，所以每0.1mg相当于0.01%苯甲酸钠。
E.d 抗坏血酸盐
吸取25ml滤好的提取液放入125ml锥形瓶里。加入0.4mlHOAc-HPO3溶液，混合。加入2.0ml靛酚溶液。如果溶液转移变成紫红色，并保持10s，就表示没有抗坏血酸存在。〔不要等10s以上，因为染料本身会退色〕。$$如果染料退色〔溶液为灰色〕，用滴定管以0.5ml增量滴加靛酚溶液到紫红色终点并稳定10s〔不要等10s以上，因为颜色在放置时退去〕。试验中加入的染料的最大体积为2.0ml。$$ mg抗坏血酸/100g＝〔V×E〕(100ml/25ml)×(100/W)$$式中，V＝靛酚溶液的毫升数；E＝mg抗坏血酸/ml靛酚标准溶液，W＝样品重量〔20g〕。
