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食品中的多环芳烃类物质和苯并[a]吡
食品添加剂〔间接引入的〕
- 薄层色谱法
- 为测定每个多环芳香烃类化合物，可将纤维素反相技术与醋酸纤维素多相技术联用。而对只测定苯并[a]吡来说，直接使用醋酸纤维素板即可。$$将20g纤维素(m)和100ml水放入高速混合器中。快速均化10min。用薄层涂敷器把吸附剂涂在5块20×20cm板上，薄层厚度为500μm。薄层板以空气充分干燥。在使用前，用流动相溶剂异辛烷洗，把薄层板放在色谱缸中，使溶剂象色谱展开过程中同样的方向移动到色谱板顶部，与吸附剂涂敷方向成90℃角。取出色谱板，让过量的异辛烷挥发掉，从板的顶部刮去1cm宽的吸附剂并除尽刮处的物质。把薄层板存放在保干器中，到用时取出。$$向展开缸中倒入50ml流动相溶剂异辛烷，平衡30min以上，在稍黑的房间里，用50μl注射器将全部苯提取液点到色谱板上，点成约0.5cm宽，10cm长距色谱板底边2cm的长条。〔为了能完全的分离，点浓缩液时应保持狭窄的样带。最好以每次50μl的增量点样，在每次点样后，让溶剂挥发掉，无须进一步干燥〕。用吸量管移取0.2ml苯淋洗烧瓶壁，象前边一样将淋洗液转移到色谱板上。浓缩液及三份淋洗液转移到薄层板上应在10min内完成。为了帮助鉴别，在紧挨样品的旁边点上多环烃类标准溶液的混合液。$$将色谱板倒转180度，浸入装有展开剂DMF-乙醚(20+80)的浸渍缸中，浸湿的位置应在起始线的0.5cm以内。取出色谱板，让过多的流动相溶剂沥干约15－20s。将板子放回原来的位置〔起始线处于底部〕，放入用异辛烷饱和的色谱缸中，在暗处展开到溶剂达到板的顶部〔在25℃约1h〕。$$当完全展开时，从色谱缸中取出板子，趁湿在长波和短波UV灯下观察多环化合物的位置，圈出荧光带的位置。$$取出色谱板，用刮匙刮下荧光带周围的吸附剂，弃去。将每个圈出来的荧光带的吸附剂分别转移到几个125ml烧杯中，立刻用5－10ml一份的热甲醇淋洗多环烃，直到最后溶剂在UV灯下观察不到荧光。提取时反复转动烧杯，用氮气通过30ml加压过滤器，将每次提取液滤入50ml瓶中〔在用热甲醇提取之前，用刮匙研磨收集在烧杯中的吸附剂，以达到回收全部化合物的目的。从吸附剂上洗脱化合物，进行三次或四次提取就足够了〕。提取后，蒸发每个提取液到约0.5ml，加入5ml苯，再蒸发到0.2－0.3ml。不要蒸发至干。保存浓缩液以用于醋酸纤维素板TLC试验。$$将50g醋酸纤维素和275ml乙醇放入高速混合器中，高速均化3min。〔此量之浆料可以制备10块薄层板。用薄层涂敷器，涂敷薄层板(10×20cm)，厚度为1000μm。使薄层板空气干燥4h，存放在保干器的硅胶上方，(k)(1)，用时取出。$$向展开缸中倒入50ml流动相溶剂〔乙醇-甲苯-H2O，17+4+4)，平衡1h。在稍暗的房间内，按前述方法将从纤维素薄层板上得到的提取液点样。用吸量管取四份0.2ml苯淋洗瓶壁 ，转移每次淋洗液到薄层板上〔方法同上〕。在约10min的时间内将每个提取液完全转移到薄层板上。待溶剂挥发后，将薄层板放进色谱缸中，在暗处展开色谱直到溶剂前沿达到色谱板的顶部〔在25℃时约1.5h〕。$$完全展开时，从色谱缸中取出薄层板，在Chromato-Vue室内趁湿在长波和短波UV灯下观察谱带位置。圈出荧光带的位置。
