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鱼类和贝类中的汞〔甲基汞〕
食品中痕量级金属和其它元素
- 快速气相色谱法
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A 原理
依次用丙酮、甲苯洗涤可以除去均一化海洋食品中有机干扰物。加HCl可以使与蛋白结合的甲基Hg释放出来，再用甲苯萃取，然后用带电子捕获检测器的GC测定其中的CH3HgCl。
B 试剂
B.a 溶剂
丙酮、甲苯和异丙醇均用全玻璃器皿重蒸纯化。注意：甲苯易燃!且吸入体内有害，故使用到甲苯的操作均应于通风橱内进行。
B.b 盐酸溶液(1+1)
加浓HCl至等体积的重蒸或去离子H2O中并混匀。将2体积的甲苯与1体积的HCl于分液漏斗中剧烈振摇15s。弃去甲苯萃层。重复上述萃洗步骤4次。酸溶液可以预先配制，但甲苯萃洗这一步必须在使用前进行。以免形成有电子捕获信号的化合物，在色谱图中出现多余的峰。$$分析测定前，测定试剂空白以检查试剂质量，在MeHg出峰位置上有杂质峰的HCl及溶剂不能使用。
B.c 载气
GC纯的Ar-CH4(95+5)。
B.d 硫酸钠
无水级试剂。于600℃高温炉中加热过夜，冷却，贮存于加盖瓶内。瓶盖衬以经丙酮洗涤的Al箔，以免试剂被瓶盖污染。14－15min出现的峰可以通过重新加热Na2SO4〔600℃过夜〕除去。
B.e 氯化甲基汞标准溶液
保持密封。瓶塞以聚四氟乙烯胶带密封。
B.e.1 贮备液
1000μg Hg/ml。称取0.1252g CH3HgCl于100ml容量瓶中，用甲苯溶解并稀释至刻度。
B.e.2 高浓度中间液
40μg Hg/ml。将10ml贮备液用甲苯稀释至250ml。
B.e.3 低浓度中间液
2.0μg Hg/ml。将10ml高浓度中间液以甲苯稀释至200ml。
B.e.4 标准工作液
0.005－0.10μg Hg/ml。每月重新配制。用甲苯按下法稀释至容量瓶中：浓度为2μg Hg/ml的溶液，10ml稀释至200.0ml；其浓度为0.10μg Hg/ml；0.10μg Hg/ml的溶液，20ml稀释至25ml；15ml稀释至25ml；10ml稀释至25ml；10ml稀释至50ml；10ml稀释至100ml；10ml稀释至200ml；其浓度分别为0.08,0.06,0.04,0.02,0.01及0.005μg Hg/ml。
B.f 氯化汞柱处理液
1000ppm HgCl2。溶解0.1000g HgCl2于100ml甲苯中。
B.g 增强液
B.g.1 贮备液
1000μg Hg/ml。称取0.1252g CH3HgCl于100ml容量瓶中，以H2O稀释至刻度。
B.g.2 增强工作液
15μg Hg/ml。将1500μl贮备液以H2O稀释至100.0ml。
C 仪器
全部玻璃器皿用洗涤剂洗涤，然后依次用热自来水和重蒸或去离子H2O彻底冲洗，最后用丙酮和甲苯各洗三次，于通风橱中晾干。$$除必须使用指定的填充柱外，其它仪器均可以相当的仪器代替。
C.a 离心机
IEC CRU-5000或CR6000型。
C.b 离心管
玻璃，容积50ml，带具聚四氟乙烯衬里的螺旋盖。
C.c 量筒
玻璃，A级，容积50ml，具磨口玻璃塞。
C.d 移液管
一次性玻璃制品。
C.e 滴管
玻璃，容积5ml。
C.f 机械振荡器
S-500具有定时功能的旋转振荡器。
C.g 气相色谱仪
Hewlett-Packard 5710A型色谱仪，配以^63^Ni线性电子捕获检测器。7131A型记录仪和6ft×2mm〔内径〕硅烷化玻璃柱，填充涂有5%DEGS-PS的100－120目Supelcoport担体。填充柱两端距进样口及检测器汽门螺母间留出不少于2.0cm的距离，塞以2cm高质量、硅烷化的玻璃毛以固定担体。在载气入口与柱间装以除氧管和分子筛干燥管。按厂家说明书老化柱子如下：室温下以30ml/min的流速通载气0.5h以冲洗柱子，然后于50℃加热1h，再以4℃/min的速率程序升温至200℃并过夜。老化期间不接检测器。在老化、处理及使用过程中，载气流速始终保持30ml/min。操作条件：柱温155℃，进样口温度200℃，检测器温度300℃；载气流速30ml/min；记录仪走纸速度0.5－1.0cm/min。于上述工作条件及对柱子作下述HgCl2处理后，CH3HgCl将于进样后2－3min出峰。
D 氯化汞柱处理
据厂家说明书老化的5%DEGS-PS柱，只有经HgCl2溶液(f)处理后方可用于测定CH3HgCl。因柱效随时间的延长会有所下降，柱子在使用期间也应定期进行处理。按下述方法正确地对柱子作HgCl2处理。
D.a 紧接着200℃柱老化后或用于分析每2－3天后
若柱子刚按厂家说明书老化完毕，或用于分析测试样品2－3天后，按下法进行：将柱温调至200℃，每隔5－10min注入一份20μl HgCl2处理液，共进样5次。保持200℃过夜。色谱图上将有一些大宽峰。次日晨，将柱温降至155℃再用2份20μl HgCl2处理液处理柱子，宽峰于约1－2h后出现，表明处理过程完成，柱子可以使用。
D.b 在分析测定的日子
若柱子已按(a)处理或于155℃分析测定样品一整天，可于工作完成后按下法处理以备次日使用：将柱温降至115℃，注入一份20μl HgCl2处理液。待大宽峰于色谱图中出现(11－20h)，表明处理过程完成，下一个工作日，将柱温升至工作温度155℃，待基线平稳后，柱子即可使用。
D.c 于155℃分析测试萃取物期间
若柱子正于155℃分析样品萃取物，而柱效和峰高已下降至必须进行HgCl2处理，则可注入2份20μl HgCl2处理液，于1－2h后色谱图中将出现大宽峰，表明处理过程结束，待基线平稳后，柱子即可使用。
E 氯化甲基汞的萃取
除称量外，其它操作均在通风橱内完成。准确称取1g均匀的测试样于50ml离心管中，〔另取一离心管作空白测定管，与样品管同步操作〕加入25ml丙酮，盖紧，并用手剧烈振摇15s，打开管盖，于2000r/min离心5min，小心倾泻并弃去丙酮〔必要时可用滴管吸走丙酮〕。重复上述用25ml丙酮洗涤的步骤两次，必要时可于振摇前用玻璃捣碎组织。加入20ml甲苯，盖紧，并用手剧烈振摇30s，打开管盖，于2000r/min离心5min，小心倾泻并弃去甲苯层。若在最后的GC图上出现多余的杂质峰，则可能表明此处加入丙酮和甲苯后需更剧烈地振摇。欲测定样品中MeHg回收率则应向离心管中加入增强工作液(g)。$$加2.5ml HCl溶液(b)于盛有经丙酮和甲苯洗涤样品的离心管中，必要时可用玻棒将组织捣碎。加入20ml甲苯，于机械振荡器上温和但彻底地振摇5min〔2min手动〕。打开管盖，于2000r/min离心5min。若离心后发现有乳化层，加入1ml异丙酮，用玻棒轻轻搅至甲苯层中，以消除乳化现象，但要小心别把异丙醇与水搅混。空白管中亦加入等量的异丙醇。没有乳化现象切勿加异丙醇，因为异丙醇与HCl剧烈混合会在色谱图中出现干扰峰。丙次离心，用滴管小心将甲苯层转入刻度管中，离心管壁用1－2ml甲苯洗涤，洗涤液也并入刻度管内。重复上述萃取步骤一次，两次萃取液合并于同一刻度管内，以甲苯稀释至50ml，加塞，混匀，加入10g Na2SO4，再次混匀，塞紧〔用聚四氟乙烯胶带封死〕后可置冰箱中过夜。用GC法分析。
F 气相色谱法
注入5μl浓度为0.005μg Hg/ml的标准液，以确认GC系统处于正常工作状态。两次进样间CH3HgCl峰高之差应小于等于4%。测定各标液以检查色谱仪的线性情况。$$注入5μl浓度与试样萃取液大致相当或略高的标液，待CH3HgCl峰一出现，立即注入另一份5μl萃取液，待样品CH3HgCl峰及前景出现后再立即注入另一份5μl的标液。由于柱效与峰高随时间逐渐下降，每测一份样品均应随即测定标准溶液，然后比较样品峰高与标准的平均峰高，以计算样品中Hg的浓度。$$测得的峰高以相同衰减及记录仪灵敏度条件下测得的方法空白之峰高加以校正，然后与两次进样测得的标准溶液的平均峰高比较，计算出测试样中MeHg的含量，以μg Hg/g (ppm Hg)表示：$$ μg Hg/g 鱼样＝(R/R')×(C'/C)×50$$此处，R＝样品萃取液CH3HgCl之校正峰高，R'＝标准溶液两次重复测定CH3HgCl的平均峰高，C＝测试样品的重量(g)，C'＝标准溶液中Hg的浓度(μg /ml)，50＝最终体积(ml)。
