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食品中的硒
食品中痕量级金属和其它元素
- 荧光法
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A 仪器
A.a 荧光计
带滤光片的荧光计。
A.b 比色杯或比色管
Pyrex培养管，12×75mm，经比较选择适用于荧光仪者。
A.c 轴杆振荡器
BB型或其它相当的装置，设置于最大速度。
A.d 分液漏斗
玻璃，250及125ml，带聚四氟乙烯塞。
B 试剂
〔除特殊标明外，全部采用分析纯试剂和用玻璃器皿重蒸纯化的H2O〕
B.a 硝酸
用玻璃器皿蒸馏纯化，弃去最初及最后的10%。
B.b 稀硫酸
5N。将140ml H2SO4以H2O稀释至1L。
B.c 氢氧化铵溶液
约6N。将400ml NH4OH以H2O稀释至1L。
B.d EDTA二钠盐溶液
0.02M。将7.445g Na2H2EDTA·2H2O溶于H2O并稀释至1L。
B.e 2，3-二氨基奈〔DAN〕溶液
1mg/ml。将DAN〔纯度尽可能高〕于干净研钵中研成细末。取一支250ml分液漏斗，茎内填入小块玻璃毛，加入150ml 5N H2SO4和0.150g DAN，于振荡器上振荡15min使DAN溶解。加入50ml环已烷，振荡5min，静置5min分层后，将下层溶液排放到另一分液漏斗中，弃去环已烷层〔上层〕。重复用环已烷再萃洗两次，经三次萃洗后，将下层溶液排放到具玻塞的低光化性烧瓶中，覆盖一层1cm厚的正已烷，贮存于低温中。溶液可稳定几个星期。
B.f 硒标准溶液
B.f.1 贮备液
100μg /ml。溶解0.1000g黑Se〔纯度大于等于99.9%〕于5ml HNO3(a)中，略微加热使溶解。加入20ml 5N H2SO4后以H2O稀释至1L。
B.f.2 工作液
用H2O及5N H2SO4稀释贮备液，使得Se于0.1N H2SO4中浓度约等于估计的样品浓度。溶液贮存于全玻璃容器中。溶液可无限期稳定。
C 标准曲线与荧光空白的制作
在制备及测定样品时，吸取适当体积的Se标液及10ml H2O〔空白〕，按处理样品的方法，与样品同时制备和测定标准及空白。以空白为零点，测定525nm波长下各标准的荧光强度，或从各标准荧光强度中扣除空白值。以荧光读数对ng Se/6ml环已烷溶液作图即得标准曲线。标准曲线要求每天制作。
D 测定
〔为确保荧光测定时的充分洁净，除样品池外，其它玻璃器皿均要用酸洗涤。每次测定前尤其要清洗克氏烧瓶，锥形瓶，分液漏斗，离心管及玻珠等。洗涤玻璃器皿时，先用热水冲洗，于烘箱中烘干后再用热HNO3-H2SO4(1+1)洗涤，然后顺序用热自来水和重蒸水冲洗干净，于烘箱中烘干或空气中自然风干。样品池只需依次用乙醇和丙酮洗涤即可。除特殊注明外，不要使用塑料器皿。$$准确称取干重小于等于1.0g，含Se量小于等于0.8μg 的适量样品于盛有10ml H2O的100ml克氏烧瓶内，加入3粒玻珠，转动烧瓶使样品润湿。加入10ml HNO3(a)，〔也可不加H2O，只加10ml HNO3，如果样品将加入的10ml HNO3全部吸收，则应增加HNO3量，室温下消化过夜。〕小心加热蒸发至体积约为5ml，注意防止生成大量泡沫或产生崩溅。冷却，加入6.0ml 70%的HClO4及5.0ml H2SO4，放回已冷却的加热器上加热，至溶液先变黄然后变无色。消化期间应避免碳化，否则将引起Se的损失。若发生强化，则应重新取样，并适当增加HNO3-HClO4与样品的比例。若仍不能消除碳化，则应在刚出现黑色时即往溶液里加添少量HNO3。$$取下烧瓶，转动使烧瓶的球形部分及瓶颈下部都被润湿。放回加热器上加热至溶液无色并生成白色烟雾。$$取下烧瓶，转动烧瓶，加入1.0ml 30% H2O2，淋洗烧瓶内壁，并继续转动烧瓶至不再冒烟。重新加热至内容物剧烈沸腾并重新出现烟雾。重复上述加入H2O2并加热的过程两次，待最后一次出现白烟后，继续加热5in，冷却，加入30ml H2O，淋洗烧瓶内壁并混合均匀。用2份10.0ml H2O与1份5ml H2O定量将消化液转入250ml具玻塞的锥形瓶内。依次加入10.0ml EDTA溶液，25.0ml 6N NH4OH及5.0ml DAN溶液，每加入一种溶液后均需混匀。迅速加热至剧烈沸腾，严格控制沸腾2min。$$让反应混合液于室温下放置1－2h。注意全部样品，标准及空白均应放置相同的时间。精确加入6.0ml环已烷，加塞，于振荡器上振荡5min后转入125ml分液漏斗中静置5min分层，弃去下层水相，并将环已烷层排放到15ml离心管内离心5min，以进一步分离除H2O。取约5ml于荧光计样品池中。$$以试剂空白为零点，测定525nm波长下样品的荧光强度，或从样品读数中扣除空白。由标准曲线推算出Se的含量。尽管样品与空白的荧光强度随着时间都会增加，但在1－2h反应期间，净读数〔样品-空白〕保持不变。
