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蛋中的〔挥发性〕脂肪酸
蛋和蛋制品
- 气相色谱法
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A 试剂
A.a 丙酮
精制品。
A.b 二氯乙酸〔DCA〕溶液
0.5N。称0.645g精制DCA放入10ml容量瓶，用丙酮稀释到刻度，当天配制。
A.c 甲基庚基〔甲〕酮〔MHK〕溶液
A.c.1 标准溶液
用丙酮将280mg MHK稀释到200ml〔浓度可按气相色谱仪的灵敏度要求调节，校正和测定所用浓度应相同〕。
A.c.2 稀释液
用3体积丙酮稀释1体积标准溶液。
A.d 标准酸溶液
用气相色谱检查甲酸，乙酸，丙酸和丁酸试剂的原有浓度。在丙酮中溶解0.834g酸并稀释到100ml，配制各种酸的标准溶液，移取10ml溶液放入锥形瓶，加10ml H2O和2滴酚酞，用0.1N NaOH滴定，测酸的含量。$$ mg 酸/ml标准溶液＝ml 0.1N NaOH×当量浓度×F $$式中对甲酸F＝4.60；乙酸6.01；丙酸7.41；丁酸8.81。
B 仪器
B.a 蒸馏装置
标准蒸馏装置。
B.b 气相色谱仪
使用具有全玻璃注射器和柱系统的气相色谱仪。如果HCOOH是被测酸之一，使用Ar离子检测器，否则可用火焰离子化检测器。$$典型的操作条件：温度〔℃〕－注射区200，检测器170，柱温100；Ar流50ml/min；以及1.8cm(6')玻璃柱，火焰离子化检测器可用He作为载气。
B.c 填充柱的制备
称1.3g已二酸乙二醇酯放入150ml烧杯，在搅拌下溶于70ml丙酮。称0.26g85%H3PO4放入第二个烧杯并溶于30ml丙酮。将两份溶液混合。称12.5g110-120目Anakron ABS，放入500ml圆底烧瓶，加入已混合的丙酮溶液，在35度水浴中用减压旋转蒸发器蒸发〔足够填充一个18m柱〕。$$均匀填充柱子，以大约20ml/min速度使Ar或N通过柱子，并在150℃柱加热炉中超过12h，使流出物直接通过1.6mm不锈钢管进入与炉子隔热的小试管。柱的基质流入试管超过2h，实际上已经停止时，柱即备好待用。
C 校正
如下述配制标准酸混合液：称取20ml各标准酸溶液，放入同样的100ml容量瓶中，用丙酮稀释到刻度，混匀〔溶液Ⅰ：大约5mg酸/3ml〕。分别将15，10和5ml溶液Ⅰ用丙酮稀释到25ml。将5和1ml溶液Ⅰ用丙酮稀释到50ml配成含量约为3，2，1，0.5和0.1mg酸/3ml的溶液。移取3ml标准酸混合液放入玻璃瓶，加10ml MHK内标，用Sn箔或聚四氟乙烯螺旋帽封严，混匀。$$调节气相色谱仪的灵敏度和衰减，以适应到设置的标样范围无需在稀释。用同一仪器对标样和样品溶液进行校准，平行二次将2±0.2μl溶液注入气相色谱仪。如果必要使用较小体积使标准都在表盘上。用r对W做出各酸的校正曲线〔r＝酸的峰高/内标峰高，W＝4ml丙酮溶液总体积中酸的mg〕。如果当天不用，应把溶液存放在冰箱中。$$当溶剂峰拖尾入其它峰时，按不存在其它峰一样画出溶剂正常所出现的峰尾线。用这条延长线为基线来测定上述所有峰高，测出留下的峰对通常基线的峰高。
D 溶液制备
〔如果可用样品比规定的少，成比例地适当调节重量和体积。〕
D.a 仅对挥发性酸
D.a.1 液蛋或冻蛋
称80g样品15-1(a)或(b)，放入已称重的500ml锥形瓶，加约150ml H2O，剧烈振荡。
D.a.2 干蛋
称25g样品15-1(c)，放入250ml烧杯，用粗搅棒加H2O搅成匀浆，以约200ml H2O将混合物转入已称重的500ml锥形瓶。$$加25ml 1N H2SO4入如〔1〕或〔2〕所得混合物，摇约1min。加20%磷钨酸溶液〔通常40ml足以得到澄清的滤液〕，用H2O稀释到350g，摇1min。在250ml瓶中，于2000r/min离心10min，过滤。
D.b 对挥发性酸及琥珀酸或其它不挥发性酸
D.b.1 液蛋和冻蛋
移取150ml滤液D〔比重约为1.00〕，放入蒸馏瓶中，用H2SO4(1+1)使溶液对刚果红试纸呈酸性。按17-24C蒸气蒸馏。收集200ml蒸馏液并将其转到500圆底烧瓶，以酚酞指示剂，用0.01N NaOH定量中和。过量1ml 0.1N NaOH。如果颜色褪去，再加。在旋转蒸发器上于50－60℃浓缩到5－10ml。如果颜色褪去，再多加0.5ml 0.1N NaOH。转入50ml圆底烧瓶，在旋转蒸发器上于50－60℃蒸发到干。加热前，用真空泵脱气防止爆沸。$$另一种方法是将蒸气馏分转移到6000ml烧杯，用0.01N NaOH中和，如上述加入1ml 0.1N NaOH，在蒸气浴上通空气流浓缩到约50ml。转到150ml烧杯，在空气流中于蒸气浴上浓缩到5－10ml。转入50ml圆底烧瓶，在蒸气浴上于空气流中蒸发至干。加入与所加入的NaOH总量相当的0.5N DCA，并稍过量。在酸完全被释出之前，由酚酞产生的红色消失，加DCA直到挥发性酸盐的不规整粗粒完全被细的絮状二氯乙酸钠取代。$$加1.0ml MHK内标溶液和丙酮，使总体积为4.0ml。是必要的。〔只有当如下段所述酸响应比满标大时才需要稀释〕用塞子塞住，用涡流型试管混合器充分混合。如果涡流混合器不适用，用刮刀或碎晶体磨擦圆底烧瓶壁。塞好并充分摇动，5－10min后再混合摇动。把溶液倒入衬以Sn箔或聚四氟乙烯螺帽的瓶，密封。$$向气相色谱仪注射2±0.2μl，如果用于校准可用更少体积。若酸浓度给出比满标大的响应，用不少于1ml螺帽瓶中的MHK稀溶液稀释1.0ml溶液，记录样品和所用稀释液的体积。如果需要进一步稀释，移取附加MHK稀溶液入已稀释好的样品溶液，混合。对每种酸，均用与记录仪量程和响应极限相匹配的最大峰高。〔例如：如果只有HOAc浓度大，需要稀释，则从稀释液的色谱图中计算HOAc，而其它酸则从未稀释液的色谱图中计算〕。从校正曲线上测定每一种酸的mg，乘以稀释倍数，F＝稀释后的体积/稀释前的体积。平行进行GC测定。计算酸的平均重量W。如果溶液在制备之日以后使用，应存放在冰箱内。在用蒸气蒸馏150ml含1N H2SO4和20%磷钨酸的溶液所得到的200ml蒸馏液上进行的空白测定＝〔在D中所用各试剂的体积×150/[在过滤〔D〕前样品混合总重量－样品中固体重量]。$$用从馏出液中测定的mg除以蒸馏回收率，计算蒸馏所用的样品重量中各种酸的mg。第一份200ml馏出液的典型回收量是：甲酸0.405，乙酸0.57，丙酸0.81和丁酸0.92。将结果乘上合适的因数得到mg酸/100g样品。对按D(a)制备的溶液的因数是：液蛋或冻蛋2.92，干蛋9.34，对于按D(b)制备的溶液，因数是液蛋或冻蛋3.33，干蛋13.33。关于验证试验，见23-42E。
D.b.2 干蛋
称200g样品放入1L锥形瓶，加500ml H2O混合，避免剧烈摇动。加75ml 1N H2SO4，混匀。加125ml 20%磷钨酸溶液，用H2O稀释到1kg，摇1min。在250ml瓶中以2000r/min离心10min，过滤〔可用24cm波纹滤纸〕。移取150ml放入蒸馏瓶中，按E进行，记录剩余滤液的体积，并用来测定非常挥发性酸15-14D。
E 测定
