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海味中的脂肪酸〔挥发物〕
鱼和其他海产品
- 柱色谱法
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A 仪器
A.a 蒸汽蒸馏装置
装置的组成：能提供恒速蒸汽以产生恒速蒸馏的烧瓶〔3L〕，蒸馏烧瓶，冷凝器和200ml容量瓶。瓶颈中部附加的侧臂〔外径约9mm〕和蒸汽导入管〔外径约10mm〕的标准蒸馏烧瓶。蒸汽发生器的加热线圈是1.5m长的28号镍铬合金丝〔或等效的〕缠成的直径约为6mm的空心管状线圈，经加热发红再回火制成的。引入烧瓶的是铜的或其他非铁的金属丝，直径约2mm。将导线和接点绝缘并屏蔽，避免可能的短路和电击。$$只要处理能力在方法规定的范围并能在醋酸蒸馏时得到57±2%的回收率，任何类似的装置都可用。
A.b 层析管
约15×250mm。
A.c 配备有压力调节器的压缩空气或压缩氮气钢瓶气源
如无这样的装置，下列系统也适用：用两孔橡胶塞塞住有侧臂的1L烧瓶，通过塞子上的一个孔插入70cm长的玻璃压力管，使其达到瓶底；从另一个孔插进约8cm长的玻璃管，其上端用橡胶管与色谱管顶部相接。在烧瓶侧臂接上手动橡胶吸气球，向烧瓶注入1.5cm深的汞〔压力计管里的汞柱高指示系统压力，25cm约等于5lb〕。在烧瓶与色谱管的连接管线中配上合适的活塞，以便未接上色谱管时，维持接受器的压力，在侧壁和管之间插入第二个塞子，防止手动吸气球内的压力泄漏。
A.d 橡胶球
5ml〔滴瓶上所有类型〕。
A.e 微型漏斗
布氏型，容量2ml，底为粗孔烧结玻璃滤盘。
B 试剂
B.a 丁醇氯仿溶液
1%。用1/2体积的水洗三遍USP CHCl3，除掉其中乙醇。加10ml正丁醇到1L经水洗的、于分离器内的氯仿中，剧烈振摇；再加25ml水、振摇。静置，至下层清晰，排出。弃去上层水。清液中放入颗粒状无水硫酸钠贮存。
B.b 丁醇氯仿溶液
10%。向分液漏斗中的900ml USP氯仿加入100ml正丁醇，剧烈振摇；加25ml水，再振摇。静置，至氯仿层澄清、排出；弃水层，清液中放入颗粒状无水硫酸钠贮存。
B.c Alphamine 红R指示剂
溶50mg 3-〔4-苯胺基-1-萘基偶氮〕-2，7-萘二磺酸单铵在25ml水中〔用1滴指示剂在20ml水中产生的红色溶液，必须再加1滴0.01N HCl即变为紫色〕，每周制备新液。
B.d 甲酚红指示剂
在20ml乙醇中溶5ml邻甲酚红，加1.3ml、0.1N的NaOH，并用水稀释到50ml。每25ml水溶液用2滴。
B.e 氢氧化钡标准溶液
0.01N〔贮存在聚乙烯或石蜡衬里的瓶中并用苏打-石灰或烧碱石棉隔绝空气中的CO2〕。使用时装进10ml滴定管。〔除滴定溶液B，E，可用0.01N NaOH代替BaOH外，滴定溶液A，E，必须用NaOH溶液，因色谱法需要钠盐〕。
B.f 醋酸钠-氯化钠溶液
用水溶解12g NaCl和25g NaOAc·3H2O，并稀释到500ml。
B.g 硅酸
试剂级。100目粉末，适于色谱用。
C 蒸馏仪器的标定
在实验室安放仪器A(a)，避免通风和温度的骤变。烧瓶1.5L体积处做标记，加水至标记线，加热至沸，蒸馏前使沸腾几分钟。加150ml水于蒸馏烧瓶，加1滴H2SO4(1+1)，连接冷凝器，向蒸馏瓶插入蒸汽导管，用喷灯加热，使蒸馏烧瓶中的内容物开始沸腾。将蒸汽导管与烧瓶相连，提供蒸汽，开始蒸馏。调节蒸汽输出速率和蒸馏瓶下喷灯小火焰的高度，使蒸馏瓶中液体体积保持恒定于150ml，并以200ml/h速率收集蒸馏液〔收集200ml蒸馏液的时间，可有5min的变化；蒸馏瓶内体积保持150±10ml。必要时可瞬间中断蒸汽供应，停止沸腾，可检查150ml体积的稳定性。几次试验表明了保持蒸馏瓶中的恒定体积和蒸馏的恒定速率所需要的条件。〕。两次连续的200ml蒸馏液，在无CO2的空气下，用0.01N碱〔酚酞〕进行空白测定。$$转移50ml约0.1N的HOAc〔浓度必须精确、已知〕到蒸馏烧瓶，加1滴H2SO4(1+1)〔避免接触瓶颈〕和100ml水。收集200ml蒸馏液用0.01N碱滴定，用空白滴定值校正并计算出馏出酸的%。当回收率为57±2%时，蒸馏操作和仪器是满意的，仪器如此调整的回收率〔±2%〕，对200ml蒸馏液甲酸、丙酸和丁酸的回收率分别是40.5、81和92%。
D 溶液的制备
称取50g磨碎的物质，17-1，于已称重的500ml广口锥型瓶内，加约150ml水、塞住瓶，剧烈振摇约1min，使物质充分呈悬浮液。加25ml、1N H2SO4，混匀，用20%磷钨酸溶液〔通常40ml足够〕与之混合，沉淀蛋白质，加水至300g，剧烈振摇约1min，用24cm快速槽纹滤纸过滤。
E 蒸馏和计算挥发性酸量
吸取150ml制备的溶液于蒸馏瓶内并用硫酸(1+1)使其对刚果红呈酸性。按E蒸汽蒸馏，收集200ml蒸馏液，以酚酞为指示剂用0.01N NaOH滴定至终点，设为A；收集第二个200ml蒸馏液，用0.01N Ba(OH)2滴定至酚酞终点，设为B。用蒸馏液A所用的滴定数、经空白校正过的滴定数乘以4，计算出挥发性酸的量。
F 甲酸的测定
加2滴标准Ba(OH)2溶液到蒸馏液B中，E，在蒸汽浴上蒸干。加约5ml水到残留物中，并加入1ml 1N的HCl，其量比释放挥发性酸的所需量多些。经小滤纸滤入带接口的125ml锥型瓶中，以同样方式用水洗滤纸，使总滤液量为30－40ml。加10ml NaOAc-NaCl溶液10ml 5%的HgCl2溶液，连接锥型瓶和空气冷凝器并在蒸汽浴上回流2.5h。$$由橡胶塞附在漏斗上的玻璃虹吸管吸出溶液，转移Hg2Cl2沉淀到已称重的、带有约2mm厚石棉垫的微型漏斗中，A(e)，用水洗烧瓶，接着用乙醇洗。100℃干燥30min，冷却并称重。称重漏斗时以另一个漏斗当平衡砝码，该漏斗是垫以石棉层与同法处理的沉淀的微型漏斗。$$ Hg2Cl2的重量(mg)×0.0975＝蒸馏液中甲酸的毫克数。计算蒸馏前、瓶中样品部分初始的总甲酸，用得到的毫克数除以0.24〔第二个200ml蒸馏液中馏出的甲酸百分率〕再乘以4，即为100g分析样品中的甲酸〔注意：因子4，仅适用于按D制备的样品，如是其他的样品重量，如鸡蛋的样品，则必须用适当的因子〕。
