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海味中的脂肪酸〔挥发性〕
鱼和其他海产品
- 色谱分离C2－C4的饱和脂肪酸
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A 分配柱的制备
置5g硅酸于上釉瓷蒸发皿中，加1ml红R指示剂溶液和刚好使1N的NH4OH对其显示碱性颜色的指示剂〔通常1滴足够〕。加大量水使硅酸吸透，在BuOH-CHCl3溶液中不变粘或结块〔每批硅酸的加水量都必须测定，通常硅酸重量的变化为50－75%〕。用研棒充分混合均匀，加约25ml、1%的丁醇氯仿溶液，混成粘稠液以易于倒出。将其倾入色谱管，管的收缩端颈部塞有小棉花团，倒入时微微倾斜管，避免带进空气。如倒入时形成气泡，用长玻璃棒搅动管内悬浮物赶出气泡。$$垂直夹住管，在顶部插入带有1孔的橡胶塞，其上装有一根弯成90度角的玻璃管，用本生夹夹住管的受力处，连接玻璃弯管与压力源〔压缩气体钢瓶〕，17-24A(c)。调节压力至34.5－68.9kPa，使剩余溶液受压通过柱滴下。$$在剩余溶液移动期间，凝胶填充物下降。当柱填装物下移时，凝胶微粒会附在管壁上，但最后，管壁上的凝胶基本上也会挪走。这时是柱的最佳密度状态，柱已制成备用。加压直至溶液到达柱表面，如溶液低于表面通过，会引起干柱或柱的“龟裂”，或者出现气泡，则要将管中填充物冲洗出，用溶液再混成浆状，重新装柱。
B 硅酸适用性试验及柱的标定
B.a 标准酸溶液的制备
吸取下列酸各1ml，分别置于1L容量瓶：乙酸、丙酸、丁酸和戊酸，用水稀释到刻度并混匀，每种溶液吸取10ml分别置于125ml锥型瓶，以甲酚红为指示剂用0.01N NaOH滴定，至粉红色持续约45s。$$ ml 0.01N NaOH×当量浓度×F＝mg酸/ml标准溶液。$$式中：F＝乙酸为6.01；丙酸为7.41；丁酸为8.8；戊酸为10.2。
B.b 标准混合酸的制备
吸取50ml各酸的标准溶液，于同一个250ml的容量瓶中，用水稀释到刻度。在标准混合酸中，每种酸的浓度＝1/5标准酸溶液浓度。
B.c 已知样品的制备
分别吸取标准混合酸5ml，和25ml，于50ml烧杯里，以酚酞为指示剂，用0.1N NaOH滴至恰好中和。再过量加入10滴。在汽气浴上蒸干，如需要，也可对5ml各种标准酸溶液和5ml各种标准酸溶液的5倍稀释液单独作色谱分析。也可制备近似样品组分的混合样液。
B.d 柱分离
〔高效的分离和回收率取决于样品所用移动溶液的量〕向干燥钠盐残留物加2ml 1%的丁醇氯仿溶液。用玻璃棒边搅动边滴加硫酸(1+1)直到所有钠盐都转为游离酸〔对刚果红试纸呈酸性〕，加1g无水Na2SO4。$$酸以下列顺序流出：戊酸、丁酸、丙酸和乙酸。在柱下放50ml量筒作接受器，缓缓向柱内加上层清液，使之沿管壁而下，不要扰动柱的水平表面。加压，直至溶液达到胶体表面。用1ml溶液洗烧杯，注入柱并用玻璃搅棒将烧杯里的残留物转移进柱。加压，直至溶液将消失而进入Na2SO4层。用另外1ml溶液洗烧杯，转移进柱，用1ml溶液洗管内壁，加压，至溶液刚消失而进入Na2SO4层。用溶液注满管，每次，一个谱带前沿到达管收缩最窄部分之上2－5mm处时，记下收集的体积，更换接受器。对每种酸而言，在连续操作中，总累计体积是用于鉴别谱带的阈限。丙酸〔第三条谱带〕流出后，用10%丁醇氯仿溶液注满管，用该溶液洗脱乙酸〔约50ml 1%丁醇氯仿溶液通过柱后，丙酸被洗脱。观察实际所用体积。在连续操作中，不管丙酸出现与否，都按该体积，更换为10%丁醇氯仿溶液〕。$$将洗脱液分别移至各个125ml锥型瓶，水洗各量筒三遍，每次5ml。加1滴甲酚红指示剂溶液，用0.01N碱滴定，当终点临近时，塞住瓶，用力摇摇，使酸从液相中完全萃取出来。每一条谱带洗脱液的滴定量都要作如下的空白校正。空白如下测定：在任何酸流出前，都收集25ml从柱中流出的丁醇-氯仿溶液，加15ml冷开水，用0.01N碱如上滴定。$$如果谱带分离不清晰或回收率小于90%，则废弃此硅酸。
C 鉴定和测定
