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海味中的组胺
鱼和其他海产品
- 生物学法
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A 仪器
A.a 记波器
具有摩擦力或重力记录指针的水平肌肉杠杆臂。
A.b 肌肉浴
至少50ml容量、37℃的恒温浴，见图17-2。通过三通活塞，可方便地注入和排出。一根管通过浸在浴中的球状物或蛇形管连接到溶液接受器上；另一根管通过吸滤瓶连接真空装置作为废液连接器经棉花过滤的气泡自毛细管缓慢而连续地放出，围绕在肠周围。
B 试剂
B.a NaCl贮备液
180g/L。
B.b KCl贮备液
42g/500ml。
B.c NaHCO3贮备液
15g/500ml。
B.d 硫酸阿托品贮备液
1.0g/500ml。
B.e CaCl2贮备液
24g无水盐/500ml。
B.f 林格-罗克(Ringer-Locke)溶液
NaCl，0.9%；KCl，0.042%；CaCl2，0.024%；NaHCO3，0.015%；葡萄糖，0.1%；硫酸阿托品0.001%。加100ml(a)，10ml(b)、(c)和(d)到2L容量瓶中，加水到约1800ml，再加10ml(e)边加边搅拌，在使用前加2g无水葡萄糖用水稀释定容。不用时，将含有葡萄糖的溶液存于冰箱内，溶液发霉时弃去。
B.g 二磷酸组胺标准溶液
0.1mg二磷酸组胺/ml沸水。不用时，冰箱内贮存，可保存大于等于3个月，如需要，可制备稀的0.01mg/ml和0.005mg/ml标准溶液。如所用浴槽小于50ml，用(f)制备(g)的稀释液，避免标准液加入而稀释浴液。
B.h 豚鼠肠
称用300－400g的豚鼠。饥饿24h，击头宰杀，取出肠子。紧靠回盲肠接合处切割。保留约12cm长为第一组试样，剩余的肠子置于培养皿中的棉花上。用溶液(f)恰好盖没，撑开皿盖允许空气进入，贮存在约4－7℃的冰箱内〔低于4℃，肠将失去活性〕，根据需要用另外的肠子，其长度，应对组胺刺激产生足够的响应〔通常8天〕，可用肠的其他部位。不如回肠灵敏，但贮存后，借赤裸显著的摆锤运动，也能得到同样的响应。
C 样品的制备
D 检验
称取10g制得的样品于小研钵，加足够的水，研成均匀的糊状。添加少量水，将其移至100ml Kohlrausch烧瓶中，加1ml HCl(1+1)。加水到总体积约70ml，充分混匀。烧瓶在沸水浴中加热约20min。从水浴中取出冷却，用水稀释定容，混匀，并在Whatman No. 12折叠滤纸上过滤。〔抽滤缓慢，但用于分析，仅需收集5ml〕。滤液可在冰箱贮存10天而活性不减。用2ml 1% NaHCO3溶液中和1ml滤液，用Ringer-Locke溶液稀释至10ml。$$将肠缚在肌肉杠杆上，置肠于37℃恒温液浴中的约50ml Ringer-Locke溶液(f)中至少0.5h，对新鲜回肠，其末端，可不规率地收缩和松驰约2－3h，但对组胺的刺激，响应不尽相同。在这期间，测定可以完成，但需加入少量溶液并增加稀释标准量，以稳定肠的响应，核对几次响应，直到读数可重复。$$加入已知量的稀释标准溶液(g)到浴槽中，记录响应并将记录杆从滚筒上移开。排空浴槽，加入37℃溶液(f)洗涤容器和肠子，倒掉，再充以新鲜溶液。让肠子休息3min。估计总量和将给出近乎相同响应的、已中和的鱼肉萃取液的稀释量，加入浴槽。反复记录响应。洗肌浴容器并休息3min。在这期间，用mm刻度尺量出阶梯高差，计算与检验高差相应的标准需要量，如上轮换加入提取液和标准，直到完全一致。
