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蟹肉、牡蛎和小虾中的吲哚
鱼和其他海产品
- 比色法
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A 仪器与试剂
A.a 显色剂
在5ml醋酸中溶解0.4g对二甲氨基苯甲醛，并与92ml H3PO4、3ml HCl混合，当对二甲胺苯甲醛的纯度影响空白强度时，提纯黄色普通试剂，方法如下：$$ 在600ml HCl(1+6)里溶解100g试剂，加300ml水，在剧烈搅拌中缓缓加入10% NaOH以沉淀甲醛。一出现白色甲醛沉淀，停加NaOH溶液，过滤并弃去沉淀。继续中和，直到所有甲醛全部沉淀，但不必彻底完全，因为最后4－5g可能显色。过滤，并水洗涤沉淀至洗液不再呈酸性。在干燥甲醛，应为白色。置于干燥器中。
A.b 提纯的醋酸
如醋酸与显色剂变为淡红色，如下提纯：按规定顺序，将下列试剂加入到1L圆底烧瓶中；500ml醋酸、25g KMnO4和20ml H2SO4在全玻璃蒸馏器中蒸馏，馏出液不多于400ml。
A.c 称盐酸
5ml HCl，用水稀释到100ml。
A.d 吲哚标准溶液
准确称重20mg吲哚，于200ml容量瓶中，用乙醇稀释到刻度，冰箱中藏存二星期后弃去。
A.e 蒸馏装置
使用适用各种装置的单独的蒸汽发生器。蒸汽发生器可由1L锥形瓶和以最短橡胶管连接的全玻璃蒸汽蒸馏器组成。蒸馏烧瓶〔容积大于等于500ml〕经由喷雾收集器与直管冷凝器连结；用500ml锥型瓶为接受器。无全玻璃仪器时，可用包箔橡胶塞〔无保护层的天然或合成橡胶管及塞子会引起不同变异的蒸馏空白〕。$$确保水中无氯，氯可部分或完全抑制吲哚的显色。
B 样品的制备
B.1 蟹肉、牡蛎和虾
牡蛎肉称取50g，去水的蟹肉或剥壳生虾或煮熟小虾25g或50g〔取决于估计的吲哚量〕，转移称重部分到高速捣碎机中，加80ml水或80ml乙醇，捣碎几分钟直至均匀。定量转移混合物于蒸馏烧瓶，以最少量的、制备混合物的同样溶液冲洗捣碎容器。
C 测定
连接蒸汽蒸馏烧瓶和蒸汽发生器，缓缓提供蒸汽，直至蒸馏顺利进行。注意通入蒸汽不可过猛，避免产生过多的泡沫。提供足以使烧瓶内保持80－90ml体积的热量，在约45min内，收集350ml蒸馏液〔若用乙醇制备样品，收集450ml〕，以少量乙醇洗涤冷凝器，并入装蒸馏液的接收瓶中。$$转移蒸馏液到500ml分离器里，加5ml稀盐酸和5ml饱和的Na2SO4溶液，相继用25，20和15ml氯仿提取，每次剧烈振摇大于等于1min。将25ml和20ml的萃取液合并于500ml的分离器中，用400ml水、5ml饱和的Na2SO4溶液和5ml盐酸洗涤，保存洗涤液。经棉花垫将合并的萃取液滤入125ml干燥的分离器中。用同样的洗涤水洗涤15ml的萃取液，与其他萃取液合并在同一个125ml的分离器中。$$加10ml显色剂到混合萃取液中，剧烈、准确振摇2min，使酸层尽可能完全分层。转移9ml酸层到50ml容量瓶里，用醋酸稀释到刻度，混匀，转移溶液到适当的光度计比色池里，在560nm处测定A，显色剂可用醋酸稀释为9ml染色剂/50ml溶液，以同样的稀释溶液测定空白。$$用蒸汽蒸馏新制备的标准吲哚溶液的稀释液系列，如上所述，制备标准曲线。同样方法测定不加吲哚的蒸馏空白。
