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小虾中的吲哚
鱼和其他海产品
- 液相色谱荧光法
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A 原理
样品与甲醇和2-甲基吲哚内标捣混，过滤的萃取液用液相色谱仪在ODS反相柱上，以甲醇-水(60+40)为流动相，光谱荧光计测定。
B 试剂
B.a 纯化的水
经净化系统处理的蒸馏水。
B.b 甲醇
经玻璃蒸馏器蒸馏。
B.c 吲哚标准溶液
B.c.1 溶液A
1.20mg/ml。120mg吲哚溶于100ml容量瓶内的甲醇中，并用甲醇稀释至刻度。
B.c.2 溶液B
12μg/ml。吸取1ml溶液A于100ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度。
B.c.3 溶液C
1.2μg/ml。吸取5ml溶液B于50ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度。
B.d 2-甲基吲哚内标溶液
B.d.1 溶液A
1.25mg/ml。125mg 2-甲基吲哚溶于100ml容量瓶内的甲醇中，用甲醇稀释至刻度。
B.d.2 溶液B
62.5μg/ml。吸取5ml溶液A于100ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度。
B.d.3 溶液C
6.25μg/ml，吸取10.0ml溶液B放入100ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度。
B.e 移动相
600ml甲醇用水稀释至1L。
C 仪器
C.a 液相色谱仪
203型光谱荧光计，配备流动池，发光波长280nm，发射光波长330nm，6000型溶剂输送系统，Valco 7000 Psi进样〔注射〕装置。
C.b 液相色谱柱
C.b.1 分析柱
30cm×4mm〔内径〕，以10μm ODS反向填充使柱和色谱操作条件产生两峰之间的分辨力大于等于1.2。
C.b.2 保护柱
7cm×4mm〔内径〕，用30μm出口处可用2μm玻璃棉堵住。移动相流速1.0ml/min，典型的保留时间是：吲哚8.6min，2-甲基吲哚12.1min，为获得最佳分离效果，流速可在0.7－1.3ml/min间调节。
D 校准
制备表17-2中所示的校准溶液。$$ $T 表17-2 液相色谱荧光法测定小虾中吲哚的校准溶液^a^$$校准溶液@吲哚标准溶液浓度(1.2μg/ml)ml@吲哚标准溶液浓度(1.2μg/ml)μg@水ml@2-甲吲哚内标溶液浓度(6.25μg/ml)ml$$1@0.5@0.6@10@1.0$$2@1.0@1.2@10@1.0$$3@2.0@2.4@10@1.0$$4@3.0@3.6@ 10@1.0$$5@4.0@4.8@10@1.0$$6@6.0@7.2@10@1.0$$a.按编号吸取指定的体积，分别置于100ml容量瓶内，用甲醇稀释到刻度，冰箱中贮存。$T调节仪器，使720pg吲哚〔20μl校准溶液No.4〕的响应值大于记录仪满刻度读数的50%，注入2μl吲哚校准溶液，测量峰高，计算峰高比，R＝吲哚峰高/内标峰高。以R对校准溶液中的吲哚μg(W)作图。
E 测定
称取10.0g样品放入捣碎器中，加50ml甲醇，吸取1.00ml的内标溶液，浓度为6.25μg/ml，将移液管靠在液面上方的壁上加液入捣碎器杯内，用约5ml甲醇冲洗捣碎器杯壁，缓慢混合1min，认为内标已分布均匀，避免溅到捣碎器杯壁上。以衬铝箔的盖盖上捣碎器杯上，高速捣混3min。用约25ml甲醇冲洗捣碎器杯壁，高速混合捣混合液体〔约80ml〕1min。过滤混合物，并向液相色谱仪注射20－30μL滤液，如上述测量峰高和计算R，从校准曲线测得W〔μg吲哚〕。$$ μg吲哚/100g样品＝10W
