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淀粉凝胶鱼类的鉴定
鱼和其他海产品
- 带电泳法
- 〔注意：电泳槽的盖应有开关，当槽盒打开时，可切断电极的电流，防止接线和电极对人体的接触。〕
A 仪器
有机玻璃或耐热有机玻璃是制作盘、盒和容器的合适材料。
A.a 盘
塑料的：20×250mm，6mm深，装淀粉凝胶。
A.b 盒
塑料的：7.5×20×36cm，带平盖。背后开槽沟，以便插入电极。
A.c 缓冲液和电极容器
塑料的：5×5×18cm，一端带电极室5×5×2.5cm。
A.d 电极
18号银丝，一端缠成紧密线圈，插进电极室中；另一端穿过玻璃管，并与电源相接。
A.e 滤纸条
Whatman No.3；6×19mm为样品条，18×75mm用于连接凝胶至缓冲液及缓冲液至电极室。
A.f 电源
提供恒定15mA和190－220V电流。
B 试剂
B.a 硼酸盐缓冲液
pH8.65，以水溶解18.5g H3BO3和4.8g NaOH，并稀释到1L。如需要，用10%NaOH溶液调pH，以1+9稀释，制备淀粉凝胶。
B.b NaCl溶液
制备饱和溶液，用于电极室，以1+2稀释。
B.c 水解马铃薯淀粉
水解300g马铃薯淀粉于内含6ml HCl的600ml丙酮中，40℃、1h。加入150ml 1M的NaOAc·3H2O(136g/L)以中止反应，抽滤。用2－3L水洗涤沉淀的淀粉。再悬浮沉淀于1.5L水中，搅拌1h，再过滤并用2L水洗涤，于50℃干燥过夜。淀粉研成细粉，用pH8.65缓冲液配制一组含12、13、14%等的淀粉试验溶液。加热到正好沸点以下，倒入淀粉凝胶盘中，冷却使凝固。使用前一天的晚间制备，贮于冰箱。用已知的蛋白质萃取液测定以得到在测试中最好分离型淀粉浓度，用该批浓度的淀粉进行所有测试。
B.d 5-5-1溶液
混合5份水、5份甲醇、1份醋酸。
B.e 胺基黑10B
1.0%。2g染料溶于200ml 5-5-1溶液。
C 测定
称取20－30g绞碎的样品放入捣碎机中加40－60ml水，高速捣混2min，倒入50ml离心试管，以1800rpm离心，直至分离完全〔10－15min〕，使上层清液通过折叠的Whatman No. 1纸或用布氏漏斗抽滤，得到蛋白质提取液。$$在蛋白蛋提取液中浸泡小滤纸条，并在纸条长度的中点横切开淀粉将其插入淀粉条中，将载物盘放入盒里。被pH8.65的缓冲液饱和的大滤纸条的一端搭在淀粉盘的每一端，大滤纸另一端浸在pH8.65的缓冲液盘里。用被NaCl溶液饱和的同样纸条，连结缓冲液室和内含稀NaCl溶液的电极室。浸入银电极在两个电极室中，用恒定的15mA电流〔190－220V〕通入装置5h。$$取出盘子，浸淀粉条在染料溶液中5min，剩余染料倒回贮备液〔可用6－9次〕，用5-5-1溶液洗涤染色的淀粉条数次，除去未被染色的淀粉中的染料，留下被染成永久性兰带的蛋白质部分。$$将同样进行的可靠的样品和标准的电泳带形进行比较。
