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鱼种类的鉴定
鱼和其他海产品
- 醋酸纤维素带法
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A 原理
鱼蛋白质以醋酸纤维素做载体,在固定电压下,经一段时间,蛋白质移动。电泳结束后,纤维素带经染色、洗涤和干燥以固定图形。
B 仪器与试剂
B.a 电泳柜
分为两个室,带最小输出电压300V的可调恒电压电源,带电量计,可读数并可调节电压以得到所需电流。
B.b Gelmen点样器。
B.c 醋酸纤维素条
6(3/4)×1"。
B.d 毛细管
1.6-1.8×100mm。
B.e 滤纸
Whatman No. 1,整张裁成合适的尺寸。
B.f 二乙基巴比土酸缓冲液
pH8.6,离子浓度0.04;二乙基巴比土酸钠8.64g和二乙基巴比土酸1.2g溶于水,至体积1L。
B.g 染色剂
溶200mg丽春红染料在100ml 5%的三氯醋酸中。
B.h 洗涤液
5%醋酸溶液。
C 样品的制备
C.a 新鲜鱼
在研钵中用3ml水研碎约3g鱼肉,通过数层厚干酪布挤压出液体。如离心,方便,将鱼片放入离心管,离心压出液体,不需加水。
C.b 冻鱼
融化样品,用其液滴,不稀释。
C.c 冻干鱼
在研钵中用3ml水研碎约3g鱼肉,通过数层厚干酪布挤压出液体。如离心,方便,将鱼片放入离心管,离心压出液体,不需加水。
C.d 沾面包渣的生鱼串和生鱼块
C.e 预煮鱼串和块
在研钵中用3ml水研碎约3g鱼肉,通过数层厚干酪布挤压出液体。如离心,方便,将鱼片放入离心管,离心压出液体,不需加水。
D 测定
在缓冲液里,浸泡聚醋酸纤维素条30min〔为使带恢复原始的胶体结构,需要浸泡〕,每次都用新配的缓冲液,因为,每次可同时进行6个条,故浸泡前,需用铅笔对不同的样品条标明记号以便于区别。$$向框中每一个室加入冷的缓冲液,水平面略低于间隔板。从缓冲液中取出一条纸条,轻轻放在两 张滤纸间,吸去多余的缓冲液。$$用毛细管取出样品组织,转移毛细管到点样器,置于沿点样器两端各6mm以内处,然后,将点样器对着距纸条一端约5cm处牢牢挤压,将含样品的纸条横放在柜的隔板上,使样品在阴极一边,并使两端都浸在两个外室内的缓冲液中。用磁铁或玻璃楔子固定醋酸纸条的两端以防滑脱,保持拉紧状态。对每一纸条,重复样品的点样过程,动作要快,以防纸条变干。$$置电泳柜盖于所在位置,连接电极,设置电源,给出恒定电压。调电压〔在200-300V之间〕以获得1.5mA/每纸条的初始电流,保持该电压30min,关闭电源。从柜中取出纸条,放入Poncaun S染色剂中5min,依序在3份5%的醋酸洗液浸泡,以除去多余的染料,漂洗纸带,直到仅留下染色的蛋白质带和无染料的纤维素带。最后,吸干带并放在几层滤纸间干燥。将样品的蛋白质色带与实际肉样品色带进行比较。