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乳糖的纯度
糖及糖产品
- HPLC法
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A 原理
乳糖纯度的检测是采用HPLC法，比较2%样品水溶液与内标的响应比值和同浓度参考标样与内标响应值的比值。HPLC采用无梯度流动相，糖类材料柱和折光率检测器。
B 仪器
B.a 液相色谱仪
HP1081型，配折光率检测器，自动进样器及3390A型积分仪。室温下操作。
B.b LC柱
P-10Carbohydrate,4.6mm×25cm，配一根Whatman保护柱。若其它的柱系统具有合适的保留时间，又能分离H2O，乳糖和果糖内标的也可使用。
C 试剂
C.a 乙晴
LC级。
C.b H2O
LC级。
C.c 流动液〔无梯度〕
CH3CN－H2O(80+20)，流速：2ml/min。
C.d 果糖内标溶液
称量6g果糖粉末，转移到500ml容量瓶，用水稀释至刻度，每周配制一次。
C.e 乳糖参考标准溶液
美国药典〔USP〕级奶糖，不含葡萄糖。准确称量2g±0.2mg未经干燥的乳糖标准品，用少量的水定量地转移至100ml容量瓶。加10.0ml果糖内标溶液，用H2O稀释至刻度。每天新配制一次。
D 系统稳定性测试
D.a 重现性
用20ml/min的流速使系统平衡。注射10次25μl的标准溶液。色谱图对水，果糖及乳糖要达到基线分离，其保留时间依次应在1－2，2－3，和5－6min内。10次进样的峰响应因子〔乳糖的峰高与果糖峰高的比值〕的变异系数〔CV〕应不大于0.6%。若结果不满意，应让系统再平衡一段时间，重新测重现性。
D.b 检测器响应的线性关系
分别测定1.4,1.8,2.0,2.2和2.6%的标准乳糖溶液，对峰高响应因子与浓度进行线性回归，相关系数应达到0.999。色谱仪应每月检测一次线性关系。色谱系统有改变〔如仪器、试剂、仪器修理之后等〕时也要检验线性关系。
E 样品的制备
准确称量2g±0.2mg的乳糖样品，用少量水定量转移到100ml的容量瓶中，加10.0ml果糖内标溶液，用水稀释至刻度。样品配制好以后24h内进行LC测定。注意：制备乳糖标准溶液及样品标准溶液应使用同一种内标溶液。
F 测定
平行测定3次样品及2次参考标准溶液，每次进样25μl。若测定多个样品，则每3个样品之后测一次参考标准。用每组平行3次测定的标准响应因子的平均值计算结果。$$测定样品及标准品的水分含量〔在120℃下干燥16h的失重〕。
G 计算
%乳糖〔干〕＝(R/R')×{[W'×〔100－M'〕]/[W×〔100－M〕]}×P $$式中R和R'分别为样品和标准峰的响应因子〔乳糖峰与果糖峰的比值)；W和W'分别为样品和乳糖标准品重量的克数；M和M'分别为样品和乳糖标准品水分的百分含量；P为乳糖标准品的纯度。
