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蜂蜜中糖的分离
糖及糖产品
- 木炭柱色谱法Ⅰ
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A 原理
先将蜂蜜样品吸附到木炭上，然后洗脱，依次流出的是单糖、二糖及多糖组分。二糖对葡萄糖及果糖测定的干扰则可消除。洗脱采用逐渐增大醇浓度的方法，然后测定各种单糖，蔗糖、还原二糖〔以麦芽糖计〕，经水解后测三糖及更高级糖总量。
B 吸附柱的制备及标准化
柱外径为22mm，长为370mm，在其上部由一个35/20标准锥度的球形接头与一个1L的球形容器连接。吸附剂由Darco G-60木炭与快速助滤剂按1+1比例混合组成。塞一个玻棉塞，从下部湿润，加足量的干燥吸附剂到干燥的管中〔23－26cm〕，加真空系统，并轻敲柱的上部，吸附剂的体积可被压缩为17cm。从管中除去过量的木炭，并在上层加助滤剂，并轻轻压紧〔1－1.5cm〕。用500ml水及250ml 50%的乙醇洗柱子，并在50%乙醇介质中平衡过夜。在用水洗脱，压力为62KPa的情况下柱流速应在5.5－8.0ml/min之间。流速太慢会大大延缓分析速度。$$洗脱液中醇的含量应调整到适合于所使用木炭的保留能力。用250ml水洗净柱中的醇，定量地加含1g无水葡萄糖的10ml溶液到柱的上端，用吸气方式使其进入柱填料中〔但不要让柱干〕，在柱上端加300ml水，停止吸气，加压〔小于等于69kPa〕，用称量过的烧杯接5份洗脱液，每50ml为一份。第一份50ml应包括将样品引入柱中时吸出的10ml，将各份样品在蒸汽浴上蒸发，在80－100℃的真空箱中干燥，称重。$$从柱的上端倒出多余的水，分别用50ml 30%的乙醇和250ml水洗柱子，再加含1g无水葡萄糖的10ml 1%的乙醇液，重复色层分离，用250ml 1%的乙醇溶液按上述相同的方式洗脱。选择洗脱剂1，使其在150ml内能全部洗出葡萄糖，若必要可用2%的乙醇体系重复色层分离。$$用250ml水和20ml 5%的乙醇分别洗柱子。在柱的上端加含100mg麦芽糖和100mg蔗糖的10ml 5%的乙醇液。按上述方法用250ml 5%的乙醇溶液洗脱，称量每50ml溶液蒸干后固体的量，必要时可分别用7，8和9%的乙醇洗脱以找出洗脱剂2，洗脱剂2应能在200ml内洗脱；大于等于98%的二糖。最先选择的洗脱剂1不应洗脱出二糖。对不同的木炭填料两种洗脱剂比较满意的组合方式为1%,7%；2%,8%和2%,9%，最后用100ml 50%的乙醇洗柱子，柱子保存在该溶剂系统中。
C 各组分的制备
用250ml H2O洗柱子，倒掉上端剩余的溶剂，加20ml洗脱剂1，使其通过柱子，弃去流出液，在50ml烧杯中把1g样品溶解于10ml洗脱剂1中。用长颈漏斗将样品转移至柱的上端，并使其进入柱的填料中。用15ml洗脱剂1漂洗烧杯及漏斗，并加入到柱的上端。从引入样品开始收集所有的流出液到250ml容量瓶中。加250ml洗脱剂1，总共精确收集250ml〔流分1，单糖〕。倾倒出过量的溶剂，加入265－270ml洗脱剂2，用容量瓶收集250ml〔流分2，二糖〕。从上端倒出多余的洗脱剂，加110ml 5%的乙醇〔洗脱剂3〕，用容量瓶收集100ml〔流分3，三糖及三糖以上组分〕。将各组分充分摇匀。$$柱子在用50%的乙醇饱和下，将出口封住后可长期保存。使用8次后废弃。
