中国化工网首页 >> 化工助手 >> 化学物质分析方法数据库
蜂蜜中糖的分离
糖及糖产品
- 木炭柱色谱法Ⅱ
-
A 原理
B 试剂
B.a 柱子
B.b 乙酸缓冲溶液
0.1M,pH4.5。将5.72ml HOAc加到500ml水中，用1M的NaOH将pH调至4.5，稀释到1L。
B.c Tris缓冲溶液
pH7.6。称量48.44g三羟甲基甲胺，加500ml水和384ml 0.8M HCl，必要时将pH调到7.6，然后再稀释至1L。
B.d 葡萄糖氧化酶
过氧化物酶试剂(GOP)－将120mg葡萄糖氧化酶和32mg过氧化物酶到400ml tris缓冲液(c)中。将270mg联甲苯胺·2HCl的溶液加入在520ml水中。然后装入棕色瓶中保存于冰箱中。若有必要，使用前可过滤一下。稳定期大于等于6周。
B.e 转化酶试剂
将12.5mg转化酶〔来自发面酵母，基本不含蜜二糖酶，活性大约为200单位/mg)溶解在50ml pH4.5的醋酸冲液(b)中。
B.f 葡萄糖标准溶液
0.1mg/ml。将25.0mg葡萄糖溶解在装有25ml水的250ml容量瓶中，煮2min再稀释至刻度或直接稀释至刻度、放置2h后再使用。
C 各组分的制备
D 糖的测定
D.a 葡萄糖
将5ml流分1稀释至100ml，向两个18×150mm的试管中各加2ml稀释后的溶液。然后，在架子上放一个装有2ml水的试管，接着放一个装有2ml葡萄糖标准溶液(100μg/ml)的试管，2个样品管，最后再放一个标准。若需做更多样品，可按此顺序重复排列。根据所使用设备选择适宜的时间间隔〔如：用流通池可选30s或60s，若是手动样品池时间可长一些〕在室温下加5.00ml葡萄糖氧化酶试剂到每个试管中，从空白〔装不的试管〕开始加起。加完后60min时，向第一个管中加0.15ml 4N HCl，用旋转混合器混匀。$$其它的溶液在相同的时间间隔同法处理。用空白调仪器的零点，然后在530nm处测加酸1min后每个管中溶液的吸光度A值。平均每一对样品的A值并计算葡萄糖的浓度，计算时用处于样品管前和样品管后两个标样的平均值A'：$$试管中葡萄糖(μg)＝(A/A')×标样管中葡萄糖(μg)$$ %葡萄糖〔蜂蜜中〕＝试管中葡萄糖×2.5/样品毫克数$$式中2.5＝20〔稀释系数〕×250〔流分体积〕/1000(μ/mg)×2〔试管中的体积〕。
D.b 蔗糖
将5ml流分1稀释至100ml，向两个18×150mm的试管中各加2ml稀释后的溶液。然后，在架子上放一个装有2ml水的试管，接着放一个装有2ml葡萄糖标准溶液(100μg/ml)的试管，2个样品管，最后再放一个标准。若需做更多样品，可按此顺序重复排列。根据所使用设备选择适宜的时间间隔〔如：用流通池可选30s或60s，若是手动样品池时间可长一些〕在室温下加5.00ml葡萄糖氧化酶试剂到每个试管中，从空白〔装不的试管〕开始加起。加完后60min时，向第一个管中加0.15ml 4N HCl，用旋转混合器混匀。$$其它的溶液在相同的时间间隔同法处理。用空白调仪器的零点，然后在530nm处测加酸1min后每个管中溶液的吸光度A值。平均每一对样品的A值并计算葡萄糖的浓度，计算时用处于样品管前和样品管后两个标样的平均值A'：$$试管中葡萄糖(μg)＝(A/A')×标样管中葡萄糖(μg)$$ %葡萄糖〔蜂蜜中〕＝试管中葡萄糖×2.5/样品毫克数$$式中2.5＝20〔稀释系数〕×250〔流分体积〕/1000(μ/mg)×2〔试管中的体积〕。
E 糖的分布
如果流分中含有助滤剂，则需过滤。取50ml流分1，100ml流分2，及全部流分3在有空气或N2流下用蒸汽浴蒸干，然后将其分别转移至3个称量过的50ml烧杯。在小于等于95℃的真空干燥箱中干燥至恒重。$$ %单糖＝流分1的重量(g)×500/样品重量(g)$$%二糖＝流分2的重量(g)×250/样品重量(g)$$ %高糖＝流分3的重量(g)×100/样品重量(g)
