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蜂蜜的糖化活性
糖及糖产品
- 电位滴定法
- 〔对此测定不要加热样品〕
A 原理
缓冲的可溶性淀粉-蜂蜜溶液进行温育，所需时间根据所要达到的特定终点用光度法加以确定。其结果表示为1g蜂蜜中的酶在一小时内所水解1%淀粉的毫升数。
B 仪器
B.a 反应容器
在18×175mm的试管侧面连接一个18×60mm的封闭支管。支管接在试管从下到上100mm处，与试管的下部成45度角。
B.b 光电光度计
配660nm红光滤光片或600nm干涉滤光片，1cm样品池。
C 试剂
C.a 碘贮备液
将8.80g经重新升华的I溶解在含22gKI的30－40ml水中，用水稀释至1L。
C.b 碘溶液
0.0007N。将20gKI和5ml碘溶液(a)溶解在水中，并稀释至500ml。每两天新配一次。
C.c 乙醇缓冲液
pH5.3(1.59M)。将87g NaOAc·3H2O溶解到400ml水中，将大约10.5ml HOAc溶解到水中，稀释至500ml。必要时可用NaOAc或HOAc调pH至5.30。
C.d NaCl溶液
0.5M。将14.5gNaCl溶解在水中，稀释到500ml。
C.e 淀粉溶液
称量2.000g可溶性淀粉〔专用于糖化指数测定，或相当产品〕，将其与90ml水在锥形瓶中混合。迅速加热至沸腾，尽量多摇动瓶子。减弱加热，温和 地沸腾3min，盖上，让其冷却至室温。转移至100ml容量瓶，并稀释至刻度。仔细观察淀粉碘空白吸光度A值的变化极限。
D 标定
移取5ml淀粉溶液与10ml水混合，从中取1ml加到一系列含10ml稀碘溶液的50ml量筒中。混匀取一份用水稀释并确定稀释的体积，必须使吸光度A为0.76±0.02。这是所用淀粉溶液制剂的标准稀释度。当淀粉来源变化时应重复该步骤。
E 测定
称量5g样品到20ml烧杯中，用10－15ml水和2.5ml缓冲液溶解，转移至装有1.5ml NaCl溶液的25ml容量瓶中。稀释至刻度〔在加到NaCl溶液中之前样品液应是加了缓冲液的〕。$$移取5ml淀粉溶液到反应试管的支管中，10ml样品液加到反应管中，小心不要让两种溶液混合。将反应管放进一个40±0.02℃的水浴中15min，然后将反应管前后倾斜几次使两个溶液混匀，同时开起停表，5min时移取1ml溶液，并迅速加入到盛有10.00ml稀碘的50ml量筒中，混合，稀释至预先确定的体积，在光度计上测定吸光度A值。记下淀粉与蜂蜜混合到取1ml加入到碘溶液中之间的时间，该时间为反应时间，间隔一定时间后再取1ml进行类似的测定，直到吸光度A<0.235。$$ $T吸光度/终点(min)$$0.7/>25$$0.65/20－25$$0.6/15－18$$0.55/11－13$$0.5/9－10$$ 0.45/7－8$T
F 计算
做A与时间(min)的相关图，从起始的A值开始做一条直线，让尽量多的点通过直线。由直线上查出A＝0.235时的反应时间。用该时间除以300便可以得到淀粉糖化酶数〔DN〕。$$注：对一个高DN(>35)的样品，如果来得及测定一个0.20左右的A值，那么5min读数〔测定〕足以接近终点。对于准确的测定，可重复测定，从开始起每分钟测定一次。对于低DN值的样品，可根据10min时的读数预测终点时间。在接近终点几分钟之前不必再测定，只需有2个这样的读数，5min时的读数不能准确预测低DN值体系的终点时间。
