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槭糖浆中的苹果酸
糖及糖产品
- 离子交换法
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A 仪器
A.a 离子交换管
标准派热克斯玻璃管，内径10mm，长300mm，5cm毛细管尖头。
A.b 分光光度计
适合于测390nm处的吸光度A，带配套的1cm液槽或测试管。
B 试剂
B.a 离子交换树脂
B.a.1 阳离子交换树脂
Dowex－50〔60－80目〕。
B.a.2 阴离子交换树脂
AGL－×8〔50－100目〕。
B.b (NH4)2CO3溶液
0.25N。将14.26g(NH4)2CO3·H2O溶解于水中，再用水稀释到1L。
B.c (NH4)2CO3溶液
1.0N。将57.05g(NH4)2CO3·H2O溶解于水中，再用水稀释到1L。
B.d Na2CO3溶液
1.0N。将5.3g Na2CO3溶解在水中，再稀释到100ml。
B.e HCl溶液
5%。12ml HCl+88ml水配制而成。
B.f 2，7-萘二酚溶液
将1g试剂溶解于100ml H2SO4中配制而成。
B.g 苹果酸标准溶液
在40℃下将L-苹果酸干燥18h。取0.2000g溶解在500ml水中。取已知体积的该溶液〔约10ml〕稀释到100ml，使该稀释液与显色剂反应之后的吸光度A值在0.2－0.8之间。
C 离子交换柱的制备
每个柱可取10ml干的树脂，用足够量的水拌成浆，然后用玻璃棉塞柱柱的下口，将树脂浆倒入。排水至近树脂平面，每次加2ml水洗树脂使之平衡。对阳离子交换树脂(Dowex-50)，加3或4次10ml体积的5%HCl，每次加之前让上次的酸排出至尽量接近树脂平面。再用水洗到无酸，每次用10ml水，直到检验流出液中Cl^-^显负的反应〔大约需要4倍体积的水〕。$$对阴离子交换树脂用3－4份10ml 5%的NaOH洗，每次洗前让碱尽量接近树脂平面。用水〔每次10ml〕洗至用pH试纸检验时，流出液对碱呈负反应。用加3〔或4〕×10ml 1.0N Na2CO3的方法将树脂转化为CO^2-^^^3^^型。用水〔每次10ml〕洗至用pH试纸检验时，流出液呈中性。将平衡的阳离子交换树脂垂直地安装在平衡了的阴离子交换柱上方，通过阳离子交换柱下的导管与阴离子柱上口所带的单孔橡皮塞使两个柱连接。不需装活塞，将细树脂填紧，防止树脂中流体流干〔变干了的树脂将失去活性〕。
D 苹果酸的分离
转移大约10ml糖浆样品到已称重过的10ml容量瓶中〔称量至±0.2mg〕，用水稀释至刻度。转移含6－20mg苹果酸的溶液〔约15ml〕到阳离子交换柱中，使其经洗脱到阴离子交换柱。用3×10ml水洗阳离子交换柱，让洗脱液流经阴离子交换柱，移去阳离子交换柱，用3×10ml水洗下面的阴离子交换柱以除去糖类及其它结合比较弱的可能引起干扰的酸。然后用5×10ml 0.25N的(NH4)2CO3以洗去原样品中可能存在的乙醇酸、甘油酸或乳酸等。最后用5×10ml 1N的(NH4)2CO3洗脱苹果酸，用250ml容量瓶收集45～48ml流出液，用水稀释至刻度，摇匀。
E 测定
转移1ml苹果酸的(NH4)2CO3洗脱液到18×150mm的培养管中，从滴定管中缓慢地加6ml 95%的H2SO4，前2ml沿壁加入以避免CO2的放出过于激烈。加0.1ml 2，7-萘二酚溶液，充分混合，用金属帽盖子盖紧管口，在沸水浴中加热25min以显色。使管子冷却，在30min内用1cm的液槽于390nm处测显色液的吸光度A值，空白由1ml水+6mlH2SO4+0.1ml显色剂组成，该空白也需在沸水浴上加热25min。$$样品显色符合比耳定律：α＝A/Cb，其中α为吸光度系数，C为浓度(mg/ml)，b为液槽的厚度。由于空白的变化，吸光度一天与另一天之间会有变化。所以，α值必须通过每天测定2份新鲜的苹果酸标准溶液加以确定。根据苹果酸标准与显色剂反应后的溶液在390nm处的吸光度A计算α值。根据C＝(A/αb)×〔稀释系数〕来计算样品中苹果酸的量。将糖浆中的苹果酸用标准密度(65.5℃，白利〕糖浆的方式表示。
