中国化工网首页 >> 化工助手 >> 化学物质分析方法数据库
玉米糖浆及玉米糖中的葡萄糖
糖及糖产品
- 葡萄糖氧化酶法
-
A 原理
葡萄糖可以用葡萄糖氧化酶氧化为H2O2，H2O2在有过氧化物酶的存在下与一种染料反应生成稳定的有色物质，有色物的浓度与葡萄糖的浓度成正比。
B 试剂
B.a 葡萄糖试液
该试液由4种试剂组成。
B.a.1 葡萄糖糖氧化酶
1000单位/ml；纯化品〔或相当的产品〕。
B.a.2 辣根过氧化物酶。
B.a.3 显色剂
邻联茴香胺二盐酸盐。
B.a.4 乙酸缓冲液
pH5.5，0.1M。将13.608g NaOAc·3H2O溶解并稀释到1L的水中，加2.7ml HOAc，必要时可用HOAc或NaOAc调pH。$$将40mg生色剂，40mg辣根过氧化物酶和0.4ml葡萄糖氧化酶溶解在0.1M的乙酸缓冲液中，用缓冲液稀释至100ml。
B.b 葡萄糖标准溶液
1mg/ml。将1.000gNIST D-葡萄糖〔标准参比物917，预先在真空70℃下干燥4h〕溶解在水中，然后在容量瓶中稀释至1L。混合并放置2h使变旋光化完成。使用当天新配制。
C 仪器
C.a 分光光度计
可测定540nm处的吸光度A值，配有1cm的液槽。
C.b 水浴
可控温在30±1℃。
D 标准曲线的制做
向4个50ml容量瓶中分别移取1，2，3和4ml葡萄糖标准溶液，用水稀释至刻度。混匀，然后从每瓶中取2ml分别转移到4个18×150mm的试管中〔分别含0.04,0.08,0.12,0.16mg葡萄糖〕。以2ml水作为空白。将5个管子放入30℃的水浴中5min。然后将1.0ml葡萄糖试液依次加入到5个试管中，从第一支管开始，管与管之间相隔30－60s。将管中的溶液混匀，使其在30℃下准确反应30min。立即中止反应〔30－60s间隔〕，方法是向每个管中加10ml H2SO4(1+3)。混匀，冷却至室温，用1cm液槽，以试剂空白为参比在540nm处测吸光度A。在线性坐标纸上作吸光度A与葡萄糖含量之间的关系图。
E 测定
向4个50ml容量瓶中分别移取1，2，3和4ml葡萄糖标准溶液，用水稀释至刻度。混匀，然后从每瓶中取2ml分别转移到4个18×150mm的试管中〔分别含0.04,0.08,0.12,0.16mg葡萄糖〕。以2ml水作为空白。将5个管子放入30℃的水浴中5min。然后将1.0ml葡萄糖试液依次加入到5个试管中，从第一支管开始，管与管之间相隔30－60s。将管中的溶液混匀，使其在30℃下准确反应30min。立即中止反应〔30－60s间隔〕，方法是向每个管中加10ml H2SO4(1+3)。混匀，冷却至室温，用1cm液槽，以试剂空白为参比在540nm处测吸光度A。在线性坐标纸上作吸光度A与葡萄糖含量之间的关系图。
