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玉米糖浆中的〔含量较大的〕糖类
糖及糖产品
- 液相色谱法
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A 原理
玉米糖浆溶液通过一个阳离子交换柱。糖可以按分子排阻和选择性吸附的方式加以分离。检测用示差折光计。峰的定量是以合适的标准物峰为参比，用数字积分仪进行积分定量。存在于玉米糖浆中的阿洛酮糖，果糖，葡萄糖，其它二糖〔DP2〕，DP3，DP4等可在50W-X4树脂上分离测定。适合于阿洛酮糖、果糖、葡萄糖及总DP2，DP3和DP4测定的另一种柱子为Q15－S树脂柱。
B 仪器
B.a 液相色谱仪
Waters Associates201型，配有6000型泵，R－401折光指数检测器或相当的仪器。
B.b 计录仪
惠普7100B型记录仪，配17505A型输入组件，或相当的记录仪。
B.c 数字积分仪。
B.d 循环浴
45±0.005℃。
B.e 循环浴
45±0.05℃。介质可用Dow Corning 200，5cS粘度的硅油。
B.f 注射器。
B.g LC柱
610×7mm〔内径〕不锈钢柱，填料为Aminex 50W-X4，20－30μm，钙树脂，配Waters Associates 98764型柱温控制组件，和3/8"末端接头〔内装10 μm孔径烧结料片〕。
C 试剂
C.a 流动相
去气泡水，使用前经0.22μm Millipore过滤器过滤。保持在大约65℃缓慢搅拌以去除溶解的气体。
C.b 柱填料
Aminex 50W-X4，20－30μm，19－25μm，钙型树脂。将所需量的Aminex50W-X4，氢型，或Q15-S，钠型阳离子交换树脂用水处理成浆，然后转移到350ml中孔型玻璃砂漏斗，真空抽滤除水，每10g树脂用300ml经过滤的0.3M Ca(OAc)2溶液，其pH预先用HOAc调至6.2。每10g树脂用200ml水洗。真空抽滤除去水，并于室温下保存在非光化性瓶中。
C.c 混合离子交换树脂
排出保存树脂的原溶液〔2L 1.5N NaOH〕并再生(2L 1.5N HCl)约600ml床体积的Duolite C－3阳离子交换树脂，重复2次。排出溶液(2L 1.5N HCl)并再生〔每次分别用2L 1.5N NaOH和2L 2N Na2CO3〕约600ml床体积的Duolite ES－561弱碱型阴离子交换树脂，重复2次。用水将最后一次再生过的树脂洗至pH范围为4－5〔C－3〕和6－7〔ES－461〕。空气中干燥树脂，将等重量的两种树脂混匀。避免用强碱性树脂，因为它可能会促进样品的异构化。
C.d 糖类标准
葡萄糖，果糖，麦芽糖。H2O，HHH级：麦芽三糖酸转化的右旋糖当量〔DE〕为42的玉米糖浆；阿洛酮糖；麦芽酮糖。$$通过查阅CRA (Inc. Critical Data Tables，pp. 8～13〕中上述各糖的DE值估计玉米糖浆的组成。按有关方法测定每种糖的DE值。上述各糖的纯度可用归一化液相色谱法确定。
C.e 混合糖标准
制备标准糖溶液，使每25ml中约含3g干的糖类。根据所给样品类型中的典型组成，确定每种标准糖所相应的以干重计的百分含量。以42DE玉米糖浆代表DP4组分，将42DE糖浆中的单糖、二糖及三糖干重加到用于标准制备的纯的葡萄糖，麦芽糖及麦芽三糖的干重中。将适量干重的每种标准糖加入到一个称量过的50ml烧杯中，称量至第5位有效数字。加20ml水，盖上盖子，放在蒸汽浴加热使之溶解。定量转移至25ml容量瓶，稀释至刻度后摇匀。加几滴防腐剂甲苯，室温下保存。当取样进样时应避免吸入甲苯层。计算每种糖以干重计浓度。$$ %糖〔以干重计〕＝糖重量×100/〔葡萄糖重量+α+b〕+〔果糖重量+c)+[〔麦芽糖重量×0.94〕+d+e]+[麦芽三糖×0.94]+f+g+h]+DP^^4+^^$$式中麦芽糖及麦芽三糖项乘0.94以校正其含水及微量杂质；α和b分别为由42DE糖浆和麦芽酮糖中所获得的葡萄糖重量；C为来自麦芽酮糖的果糖重量；d和e分别为来自42DE糖浆和麦芽酮糖的DP2糖的重量；f，g和h分别为来自42DE糖浆、麦芽酮糖和麦芽糖的DP3糖的重量。
D 柱子的制备
将空柱垂直放置，接一个380×7.7〔内径〕mm〔15×3/8"，外径〕的不锈钢预柱，二者中间用3/8"的接头连接。将端接头连接在柱的底部，真空系统再与端接头连接。将一个下端开口的容器〔约500ml〕通过聚乙烯管与预柱相连，将容器固定在与柱处于同一平面的位置、缓慢地用水充满柱子、预柱及容器1/3体积。将约50ml床体积的树脂拌成浆，抽真空下将其加入到容器中。将柱温升至78℃，当容器中树脂平面保持恒定时停止真空抽气。断开容器与预柱间的连接，用泵使溶剂以0.5ml/min的流速通过预柱和分离柱，过夜〔对Q15－S树脂流速为0.7ml/min〕。从预柱上拆下端接头，再把预柱从柱子上拆下。在端接头中加约5mm树脂并与柱相连。柱保存时柱末端旋上盖子。
E 操作条件
流速：0.4ml/min〔对Q15－S树脂流速为0.6ml/min〕；柱温：78℃；检测器温度：45℃；检测器衰减：8×；检测器输出电压：10mV；记录仪衰减：1×；记录范围：10mV；纸速：5.08cm/h。程序积分仪对每个峰进行梯形基线校正，防止由于峰的重叠形成的峰谷或一组峰重合形成的平台造成的基线校正错误。
F 标定
注射3μl〔约3.5毫克固体〕标准溶液。以归一化方式记录标准糖峰的积分。将DP^^4+^^组分归一化积分相加便可得到DP^^4+^^的归一化响应值。用每种组分的干重浓度除以归一化响应值求得每种组分的比值。System Ⅰ KF值〔校正因子〕可以通过每个组分的比值除以葡萄糖组分的比值而获得。用方法Ⅰ以葡萄糖为参比〔KF^^葡萄糖^^＝1〕计算出并程序化每种组分在System Ⅰ(B(C))中的KF值。当使用50W-X4树脂时在DP3保留时间及比DP3时间少100s处输入DP3的KF值，提供4-α-葡糖基麦芽糖，异麦芽三糖及线性DP4的KF值。当用50W-X4树脂对DP^^5+^^的计算KF值时DP^^4+^^KF列为默认值。
G 样品的制备
粗测样品中干物质的量。用水稀释样品到干物质重量浓度大约为12%。向每6g稀释样品中加约0.3g混合树脂，摇动10min，以除去可能与DP^^4+^^存在于同一洗脱区的其它可能干扰的离子性物质。
H 测定
注射样品之前用稀样品液抽洗4次注射器。注射30μl稀释的样品，G。当注入干物质的量与标样相当时可获得最好的准确度。对流出峰进行积分，积分按SystemⅠ和方法Ⅰ进行。在注射样品之后，用热水洗注射器4次，让空气泡擦洗注射器的内壁。用水洗注射器2次。
I 计算
当采用B(c)的方法时结果可自动计算出。列出果糖、葡萄糖、麦芽酮糖及其它DP2糖。将麦芽三糖，4-α-葡糖基麦芽糖-异麦芽三糖及线性DP4相加以DP^^3－4^^表示。将其他糖全部相加以DP^^5+^^表示。以无灰分，糖类干重报告结果。如果没有计算机积分仪，列出果糖(f)，葡萄糖(g)，麦芽酮糖，其它二糖，麦芽三糖+4-α-葡糖基麦芽糖-异麦芽三糖+线性DP4的总面积及DP^^5+^^之和的峰面积。再按下式计算各组分含量：$$ %组分＝[(组分面积〕〔组分KF值〕]×100/{[果糖面积×果糖KF值]+[葡萄糖面积×葡萄糖KF值]+…+[〔DP^^5+^^面积〕×DP^^5+^^KF值〕]}
