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桔汁中的甜菜碱
水果及水果制品
- 分光光度法
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A 试剂
A.a 氨溶液
2%；140ml NH3·H2O用水稀释至2L。
A.b 雷纳克酸铵溶液
2.5%；2.5g雷纳克酸铵溶于75ml水中，振摇30min。滤纸过滤，稀释至100.0ml。用HCl调pH至1.0并用细密玻璃砂漏斗过滤。在甜菜碱沉淀之前制备新鲜溶液。不能使用有沉淀的试剂。
A.c 丙酮溶液
70%；70ml丙酮用水稀释至100ml。
A.d 含水乙醚
140ml乙醚中加水1ml。
A.e 离子交换树脂
A.e.1 AmberliteIR-120中等粒度〔20－50目，湿式〕磺化聚苯乙烯阳离子交换树脂
用2倍柱床体积〔约500ml〕的2N HCl处理，以制备250gH型树脂。浸泡2h，排出HCl，水洗至中性且无Cl^-^存在。
A.e.2 AmberliteIRA-400强碱型阴离子交换树脂〔20－50目，湿〕
用2倍柱床体积〔约500ml〕的2N NaOH处理，以制备250gOH型树脂。排出NaOH，水洗至无NaOH存在。立即与IRC-50型阳离子交换树脂混合制备柱Ⅱ。
A.e.3 AmberliteIRC-50制备阳离子交换树脂
用2倍柱床体积的2N HCl处理，以制备125gH型树脂。排出HCl，水洗至无Cl^-^存在。
A.f 甜菜碱标准溶液
每毫升溶液1mg无水甜菜碱。称0.2623g盐酸甜菜碱于200ml容量瓶中，用水稀释至刻度。
B 柱的制备
B.a 柱Ⅰ
直径18mm内径色谱管，带有中等孔率或粗孔熔结玻璃、旋塞阀。把浸在水中的Amberlite IR-120(H)阳离子交换树脂浆加到柱中，湿树脂床高12.5cm。再生时可加100－120ml 1N HCl，并用水洗至无Cl^-^存在。
B.b 柱Ⅱ
将2体积的Amberlite IRA-(OH)阴离子交换树脂和1体积的IRC-50(H)阳离子交换树脂紧密混合，按上述转入柱，使树脂床高7.5cm。由于树脂具有不同比重，过量的水会使它们产生不必要的分层。所以柱床要密切混合。混合型树脂不能再生，仅能供2次测定。
C 样品的制备
充分振摇混匀，以保证试样均匀，用脱脂棉或快速滤纸过滤。也可压榨熟透了的水果并过滤制备鲜果汁，榨取柑桔汁使用专门装置并再过滤。
D 测定
在小烧杯中将制备好的果汁准确取样10－20ml〔内含甜菜碱5－7mg〕。用水稀释至约30ml，加0.1N HCl用pH计调至3.0，转移到柱Ⅰ，以3ml/min的流速收集流出液。当液面到达树脂床顶端，用200ml水洗柱或洗至无糖类存在。弃去流出液和洗涤液。用不少于150ml 2%NH3·H2O溶液把甜菜碱洗出，确保流出液是碱性。再用100ml水洗柱。将流出液煮沸蒸发至约25ml，冷却，用0.1N HCl调pH至7.0，再转移到柱Ⅱ〔在锥形瓶中煮沸浓缩，转至小烧杯中调pH〕。$$以1ml/min的流速收集流出液。当液体到达树脂床顶端，用50ml水洗柱。把流出液和洗涤液混合并浓缩至15－20ml，冷却，用1N HCl调pH至1.0。继续冷却至0±3℃，搅拌下逐渐加入20ml 2.5%雷纳克酸铵溶液，调pH至1.0，冷却至0±3℃，并在此温度下放置3h。用60ml中等孔率玻璃砂漏斗趁冷抽吸过滤。用少量冷的滤液转移沉淀。每次用5ml含水乙醚洗涤沉淀3次。将沉淀溶于10ml 70%丙酮，转移至25ml容量瓶中，用70%丙酮稀释至刻度。用1cm测定池以70%丙酮作参比，在分光光度计525nm处测定吸光度(4h内读数〕。从标准曲线查得甜菜碱量。
E 标准曲线的绘制
在小烧杯中将制备好的果汁准确取样10－20ml〔内含甜菜碱5－7mg〕。用水稀释至约30ml，加0.1N HCl用pH计调至3.0，转移到柱Ⅰ，以3ml/min的流速收集流出液。当液面到达树脂床顶端，用200ml水洗柱或洗至无糖类存在。弃去流出液和洗涤液。用不少于150ml 2%NH3·H2O溶液把甜菜碱洗出，确保流出液是碱性。再用100ml水洗柱。将流出液煮沸蒸发至约25ml，冷却，用0.1N HCl调pH至7.0，再转移到柱Ⅱ〔在锥形瓶中煮沸浓缩，转至小烧杯中调pH〕。$$以1ml/min的流速收集流出液。当液体到达树脂床顶端，用50ml水洗柱。把流出液和洗涤液混合并浓缩至15－20ml，冷却，用1N HCl调pH至1.0。继续冷却至0±3℃，搅拌下逐渐加入20ml 2.5%雷纳克酸铵溶液，调pH至1.0，冷却至0±3℃，并在此温度下放置3h。用60ml中等孔率玻璃砂漏斗趁冷抽吸过滤。用少量冷的滤液转移沉淀。每次用5ml含水乙醚洗涤沉淀3次。将沉淀溶于10ml 70%丙酮，转移至25ml容量瓶中，用70%丙酮稀释至刻度。用1cm测定池以70%丙酮作参比，在分光光度计525nm处测定吸光度(4h内读数〕。从标准曲线查得甜菜碱量。
