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果汁中的花青苷
水果及水果制品
- 纸色谱法
- 〔适用于葡萄汁和深色果汁〕
A 仪器
A.a 色层罐
用12×12"Whatman 1号色层纸做成圆筒，放于18×6"玻璃圆罐内，罐顶磨口，有玻璃盖。
A.b 分光光度计。
B 试剂
B.a 醋酸铅溶液
B.b 展开剂
n-BuOH-HOAc-H2O(6+1+2)。
B.c 改进的Forestal溶剂
将0.5g草酸溶解于60ml水，加30mlHCl和150mlHOAc，混匀。
B.d 显色剂
2%磷钼酸水溶液。
B.e 洗脱剂
将0.2g草酸溶于100ml乙醇，加0.2mlHCl，混匀。
C 花青苷的提取
在具螺旋盖离心管中加入10mlPb(OAc)2溶液，加入10ml原果汁，混合。加0.5mlNH3·H2O，混匀，离心。直到沉淀很好成团。弃去上层清液〔若上层液不清，则应加更多的Pb(OAc)2溶液，再离心〕。用25ml80%的乙醇洗涤沉淀两次，每次均混匀，离心，弃去洗涤液。第二次洗涤之后倒置管子5min以沥干液体。加10ml正丁醇和1ml盐酸，剧烈振摇，直至所有有色沉淀均转化成PbCl2。离心，清液倒入125ml分液漏斗。加5ml正丁醇洗涤沉淀。混匀，离心以得到上层清液。将洗涤液与在分液漏斗中的第一次萃取液合并，加100ml石油醚入分液漏斗，用力混摇，带下有色溶液〔若不分层，则再加0.5ml水，用力混摇〕。使液相完全分层后，将下层水层〔通常约2ml〕放入15ml锥形刻度离心管。分次向分液漏斗加0.2至0.5ml水，每次均混摇，放出水层，直至收集的水溶液总体积达到2.5ml〔有时第一次分离就收集到2.5ml以上，这时就不要再加水萃取〕。混匀水溶液，取0.5ml用于花青苷的发色试验。花青苷溶液用前一直存于冰箱内。
D 花青素的制备
向盛有花青苷溶液的离心管中加入等体积的2N HCl，并加入少量沸石。把用玻璃管和软木塞做成的空气冷凝器接在离心管上，将离心管放在沸水浴上加热30min。从沸水浴上取下，在水中冷却。加1ml异戊醇，用力振摇，离心。用毛细吸管将上层清液转移到小瓶中。把花青素溶液保存在冰箱中待用。
E 色谱分析
用12×12"Whatman 1号纸进行(a)和(b)的实验。纸上展开需过夜。头一天下午准备好，到第二天可展开16h。
E.a 上行纸色谱法定性分析花青苷
〔规定用于果汁而不是葡萄糖汁。因为它的图形太复杂，但作为参考还是有益的〕。制作20-38C溶液的试样条痕：从距纸的下端2.5cm处起，间隔2.5cm。用20-39C(c)毛细管点样，制作长3cm、宽0.3－0.6cm的条痕。葡萄汁需点样5－7次才能得到满意的强度，其他果汁多少各异。用相同溶液做两条不同量的试样条，其中之一可能得到较好的色谱图样。每次点完样都用冷风吹干。整部条痕完成后，干燥试样条。把色谱纸卷成圆筒，两端留1cm空隙，用棉线缝合〔做圆纸筒不要使用金属夹〕。向色层罐内加约1cm深的展开剂(b)，把色谱纸圆筒放入罐内，在室温下展开过夜，取出纸于空气中干燥。$$同时试验真实果汁中的花青苷，比较其图形。注意白光及长波紫外光产生的差异。喷洒磷钼酸溶液，观察图形变化。外来的有色天然物质与真实样品的图形明显不同。
E.b 上行纸色谱法定量分析花青苷
〔规定用于果汁而不是葡萄糖汁。因为它的图形太复杂，但作为参考还是有益的〕。制作20-38C溶液的试样条痕：从距纸的下端2.5cm处起，间隔2.5cm。用20-39C(c)毛细管点样，制作长3cm、宽0.3－0.6cm的条痕。葡萄汁需点样5－7次才能得到满意的强度，其他果汁多少各异。用相同溶液做两条不同量的试样条，其中之一可能得到较好的色谱图样。每次点完样都用冷风吹干。整部条痕完成后，干燥试样条。把色谱纸卷成圆筒，两端留1cm空隙，用棉线缝合〔做圆纸筒不要使用金属夹〕。向色层罐内加约1cm深的展开剂(b)，把色谱纸圆筒放入罐内，在室温下展开过夜，取出纸于空气中干燥。$$同时试验真实果汁中的花青苷，比较其图形。注意白光及长波紫外光产生的差异。喷洒磷钼酸溶液，观察图形变化。外来的有色天然物质与真实样品的图形明显不同。
