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葡萄汁中的锦葵花素葡萄糖苷
水果及水果制品
- 纸色谱法
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A 原理
各花青苷组分用纸色谱分离，色素被HCl蒸汽转化成氧氯化物。色谱图可用来检查锦葵花素单和双葡萄糖苷的存在，它们在康科特葡萄汁中含量很小。
B 试剂
B.1 柠檬酸溶液
0.1M(MacIlvaine的缓冲溶液B〕。溶解45g一水合柠檬酸，并用水稀释至2L。取10ml用0.1N NaOH以酚酞作指示剂滴定。调节水或柠檬酸的用量，使滴定所用的0.1N NaOH为30.00ml。
C 仪器
C.a 光密度计
Beckman Analytrol RB型，550nm干涉滤光片或相当型号。
C.b 分光光度计
Beckman B型〔或25型〕，〔可用DU-64型替换〕或其相当型号。
C.c 熔点毛细管
1.5－2.0×100mm。将玻璃管加热并拉成内径1mm两端开口的点样管。再把一端拉成直径大约1/2mm的毛细管，这么大的直径应能涂出宽度为3mm的条痕。
D 样品的制备
将5ml葡萄汁与5ml甲醇混匀，用玻璃棉过滤。$$测定作试样条痕所需溶液的体积，使每条中的色素量可比较。分别将1ml康科特葡萄汁标样和1ml各种样品滤液与25ml柠檬酸缓冲液混合，测525nm处的吸光度A。$$计算被用于制成条痕的滤液的ml数＝康科特葡萄汁标样的吸光值×0.6ml/样品的吸光值。$$0.6ml康科特葡萄汁标样的吸光值A＝0.54，谱带的分离和颜色强度都最佳。$$向5ml滤液中加4滴HCl，使之酸化。样品转至小瓶中盖好以防甲醇挥发。
E 色谱分析
色层纸46×57cm(Whatman 3MM或与之相当产品)。在距纸的底边4cm处划线。沿纸的长边做五条8cm长的条痕。用点样管点滤液8－10次，形成8cm长3mm宽的色线。每次点样后都要干燥。做一条标准康科特葡萄汁条痕，其他为样品溶液。充分干燥。纸的两面都用HCl蒸汽薰。$$把色层纸卷成筒钉住两端，保证纸的边沿不接触。用钉穿孔后用2至3个订书钉钉住。色层罐直径约10.5"、高18"，是派热克斯玻璃或相当的材料做的。加250ml水，小心放进色层纸筒〔筒不应与罐边接触〕，用12×6×24"的塑料袋，即Kordita Tunkey袋或相当品，盖好，用胶带封住盖子。当水上升到纸筒顶部时去盖。再取一张46×57cm的上述滤纸沿长边折摺，在折边剪出一个与层析纸筒直径相当的半圆，打开纸筒，像一个项圈围着纸筒放着，留在罐的上边，在纸筒的露出的顶端盖一张硬纸片，它刚好在罐的上部，继续展开10h。组分在纸上应分辨成很好的色带。取下，室温下空气干燥。纸的双面都用HCl蒸汽薰，使之转化成红色氧氯化物。
F 测定
从每条色线的中心处剪下4cm宽的长纸条，标出原点和距原点25cm处的点。以第二个标记将长纸条定位在附有550nm滤光片的光密度计上，取得光密度图，并将样品与标准比较。$$各组份按类型分开，从原点起的各类色素的顺序为：酰化单葡萄糖苷、单葡萄糖苷、酰化双葡萄糖苷、双葡萄糖苷、蔗糖以及其他水溶性物质。在各类色素内部，从原点起依次为：飞燕翠、牵牛花素、花青素、芍药素、锦葵花素。锦葵花素化合物有非常强的紫红色或紫色，它的径迹在每一类色素的前沿。$$康科特葡萄汁中含二甲花翠素单或双葡萄糖苷很少，但加州红葡萄及意大利葡萄汁中，它们的浓度相当高。将康科特葡萄汁标准的锦葵花素峰与样品的锦葵花素峰加以比较，就可以知道含有锦葵花素的产品是否存在。
