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谷物中的淀粉
谷物
- 葡萄糖淀粉酶法
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A 试剂
A.a 葡萄糖淀粉酶溶液
10mg/mlH2O。酶的纯度是关键。
A.b D-葡萄糖标准溶液
400mg无水葡萄糖/L。在使用前放置4h使其完成旋光改变。
A.c 醋酸缓冲溶液
4M，pH4.8。用H2O稀释120mlHOAc和164g无水NaOAc到1L。
A.d 三磷酸盐缓冲溶液
pH7.0。将36.3g三羟甲基甲胺和50.0gNaH2PO4·H2O〔或45.5g无水的〕溶于500mlH2O。用H3PO4在37℃调节pH到7.0，并在37℃用H2O稀释到1L。
A.e 酶-缓冲-发色团混合物
在100ml三磷酸缓冲液中溶解；30mg葡萄糖氧化酶〔黑曲霉二型〕3mg过氧化酶〔辣根Ⅰ型〕和10mg邻茴香胺.2HCl。在把邻联茴香胺加到酶-缓冲液混合液之前，应先在少量混合液中使其完全分散。在4℃贮存应不超过10天。
B 测定
〔对含有从葡萄糖当量小于14的淀粉中产生的右旋葡萄糖和多糖的产品，用2份煮沸的80%乙醇和2份在25℃的80%乙醇提取。由于乙醇抑制葡萄糖淀粉酶的活性，所以应蒸发完全除去〕。$$把样品磨碎到小于0.5mm〔40号筛〕。测定湿度，称0.5g样品〔含量不超过0.5g的淀粉样品重应不超于1.0g〕放入干燥的已称重的锥形瓶。边搅拌边加入25mlH2O。如有必要应调节pH为5－7。慢慢搅拌下煮沸3min，然后在135℃蒸压1h〔对某些淀粉可以在较低压力和温度下蒸压，但不少于1h，达到完全凝胶化〕。从蒸压器中取出，冷却到大约55℃，加2.5ml醋酸缓冲溶液和足量H2O，使溶液总重量为45±1g。将烧瓶浸入在对于所用葡萄糖淀粉酶最佳温度〔通常为55±1℃〕的带搅拌器的H2O浴中，加5ml葡萄糖淀粉酶溶液，在不断搅拌下水解2h。用折叠滤纸滤入250ml容量瓶，定量洗涤并稀释到刻度。$$将含20－60μg右旋葡萄糖的1ml一份试样移入试管。如果必要可将滤液稀释到此浓度。加2ml酶-缓冲-发色团混合液，摇动试管并放在37±1℃的暗处恰好30min使其发色。加2mlH2SO4(1+1)终止反应并在540nm处测定吸光值A。$$0－60μg右旋葡萄糖/ml和空白制作标准曲线。包括含有来源于与被测物类似的已知纯度的淀粉样品的控制。$$ %淀粉＝0.9×(M/10^6^)×(V1/1)×(250/V0)×(100/E)×(100/MS)＝2.25×〔M×V1/V0×E×MS$$式中E＝样品g，M＝从标准曲线得到的右旋葡萄糖μg。V0＝从250ml中所取一份试样ml，MS＝样品中的%固体，V1＝如果250ml被进一步稀释时的最终ml〔如果没进一步稀释则V1＝1〕。
