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加糖谷物中葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖
谷物
- 液相色谱法
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A 仪器
A.a 色谱仪
A.b 过滤柱
100×2〔内径〕mm或15×3.2〔内径〕mm，7μm氨基保护柱。
A.c 保护填充柱
任意的，C^^18^^固定相，100×2〔内径〕mm或15×3.2〔内径〕mm，7μm氨基柱，只要整个LC系统满足5-24A(b)柱的要求。
B 试剂
B.a 糖标准溶液
在真空，60℃下分别将糖标样〔果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖〕干燥12h。溶解在乙醇-H2O(1+1)，其浓度对果糖、葡萄糖和麦芽糖分别为3mg/ml，而对蔗糖为15mg/ml。LC注射后，比较样品和标样的峰响应，并相应调节标准溶液浓度使得标样响应在样品响应的10%以内。
B.b 流动相
CH3CN〔LC级〕和H2O(80+20)。用玻璃纤维滤器或用0.45μm尼龙66滤器过滤。用前在超声浴中脱气。为满足柱指标，如有必要应改变CH3CN-H2O的比值和流速。
C 样品制备
C.a 脂肪提取
加100ml乙醇+H2O(1+1)并称重。放入80－85℃H2O浴中25min并不时搅拌，冷却到室温并加乙醇到初始重量，将提取部分通过0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果混浊在不小于2000r/min离心10min。如果仍混浊，在不小于3500r/min下将提取部分再离心5min，并用0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果使用保护柱，省略步骤(c)留下滤过的提取液进行LC分析。
C.b 糖提取
加100ml乙醇+H2O(1+1)并称重。放入80－85℃H2O浴中25min并不时搅拌，冷却到室温并加乙醇到初始重量，将提取部分通过0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果混浊在不小于2000r/min离心10min。如果仍混浊，在不小于3500r/min下将提取部分再离心5min，并用0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果使用保护柱，省略步骤(c)留下滤过的提取液进行LC分析。
C.c 净化
用流动相充满C^^18^^Sep-Pak柱，并加压通过过滤器，让填料上的液体流出。用样品提取液重复2次，收集第二次流出的洗出液用于LC分析。如有必要用0.45μm尼龙注射滤器过滤。
D 测定
将样品溶液〔10－50μl〕随着以流速1.5－2.5ml/min的流动相注射入柱。注入同样体积的标准溶液，该标准溶液的峰值响应为样品峰值响应的±10%。为有足够的精密度，样品和标准液必须各进行两次注射。$$测量样品和标样中各糖峰的面积和峰高，但对检测限附近的组分和有相邻干扰峰的组分只测量峰高。$$ %组分＝(R/R')×(C'/W)×V×100$$式中R和R'＝分别为样品糖和标样糖峰面积或峰高；V＝加入样品的乙醇-H2O的ml＝100；W＝样品g；C'＝糖标准溶液浓度g/ml。$$对可能存在的NaCl干扰峰的消除
D.1
在与所用糖标准溶液相同的注射溶剂中制备约含2mgNaCl/ml的空白试液，而且在糖标准之后和样品之前立即注入空白液。
D.2
如果NaCl干扰被分析的糖峰，用在CH3CN-H2O(80+20)中0.1%TEPA溶液洗柱。用HOAc调节TEPA溶液pH到大约7。然后以1.5ml/min洗柱2h。在继续分析前用约100ml流动相冲洗柱子。这种修补仅提供暂时处理〔10次注射〕。
D.3
另外，对每升流动相加2滴HOAc，消除NaCl在果糖或葡萄糖洗脱时的干扰。注意：该步骤〔3〕仅作为步骤〔2〕一种替换法，而不是加在步骤〔2〕之外。
