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面包中的乳糖
谷物
- 滴定法
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A 仪器
A.a 支架
为防止试管在沸H2O浴中振动固定用的金属支架。
A.b 滴定搅拌器
滴定时用来搅拌溶液；搅棒用密封的玻璃管制成，在玻璃管底端烧结成圆脚状便于应用。为防止滴定管底部破碎，要使由几层粘在一起的胶带组成的边臂足够接近管顶。
B 试剂
B.a 酵母悬浮物
用5份100mlH2O冲洗25g新鲜的普通烘烤酵母，或直到最后的洗液变清。每次洗后离心并倾泻上层清液。在100mlH2O中悬浮，使用前在0－4℃存放24h。壹周后失效。
B.b 酵母培养基溶液
在水中溶解1.7gBacto胨，0.5gK2HPO4和0.33gMgSO4·7H2O，并用H2O稀释到100ml。
B.c 蛋白质沉淀剂
在200mlH2O中溶解50g钨酸钠和6gNa2HPO4，慢慢加入220ml 2N HCl混合，并用H2O稀释到500ml。
B.d Somogyi试剂
在大约500mlH2O中溶解12gRochelle盐，20gNa2CO3和25gNaHCO3，在搅拌下将其倒入溶有6.5gCuSO4·5H2O的约100mlH2O溶液中，加入10gKI，0.80g KIO3和18gK2C2O4·H2O，稀释到1L。〔只有KIO3必须准确称重〕放置几天，然后滤去任何少量沉淀。
B.e 硫代硫酸钠溶液
0.005N。稀释0.1N的溶液，当天配制。
C 测定
称10g风干面包，加5g过滤纤维并混匀。把混合物转入提取套管〔约30×77mm〕，用棉花塞好，放入Soxhlet提取器，加150ml乙醇-H2O混合液〔126ml乙醇+61mlH2O〕。在调至中等热度的加热板上提取过夜。把提取物转入250ml烧杯〔预先在40ml处作出标记〕，在蒸气浴上靠微空气流蒸发到约40ml，转入100ml容量瓶，洗净，冷却，稀释到刻度并混匀。移取10ml一份试样入50ml锥形瓶，加6ml酵母悬浮液和5ml酵母培养基溶液。用10ml水代替样品提取液进行空白试验。用插有约10cm长的6mm〔不能再小〕玻璃管的单孔橡皮塞塞住锥形瓶。在30℃恒温水浴水中速振荡2.5h。$$转入50ml离心管，以约1000r/min离心约10分钟，倾泻上层液入50ml容量瓶。用10mlH2O冲洗锥形瓶，倒到离心管中的残留物上。用玻璃棒把残留物和H2O搅匀，离心，把洗涤液与先前50ml容量瓶中的上层清液混合。再用10mlH2O洗涤，边摇边加入2.5ml蛋白质沉淀剂，稀释到刻度，混匀并过滤，弃去前几毫升滤液〔此时是合适的停止点；为了次日继续进行，应塞好瓶子〕。$$称取5.0ml清滤液放入耐热试管〔22×175mm〕，用0.5N NaOH中和到酚红终点，加0.5ml Somogyi试剂，旋转混合，加2滴苯。$$用玻璃球盖住试管并放入金属架，把装有试管的架立即浸入沸H2O浴正好15min。在水浴中冷却到约35℃避免搅拌，加2.5ml 2N H2SO4，旋转摇匀，放置1－2min。用0.005N Na2S2O3滴定过量I，在接近滴定终点时加6滴1%淀粉指示剂〔滴定应在30min内完成〕，根据空白〔H2O，酵母悬浮液和酵母培养基〕的滴定值与样品滴定值间的差值，从标准曲线上测出所含乳糖的重量。该mg乳糖值表示在100mg风干面包中的乳糖量或%乳糖。$$用0－4.5mg〔从含量1.0mg/ml溶液中取0.0,0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0和4.5mg〕纯乳糖水合物在足够H2O中配成5ml溶液，制备标准曲线。加5ml Somogyi试剂，旋转混匀，加2滴苯，按上述从“盖上试管”进行。以0mg乳糖的滴定值与各乳糖溶液的滴定值的差对以mg表示的乳糖浓度作图。
