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通心粉制品中的类叶红素
谷物
- 比色法
- 〔仅适用于测定为着色而加入的类叶红素〕
A 试剂
A.a 氢氧化钾乙醇溶液
在蒸气浴上温热，把10gKOH溶于100ml乙醇。
A.b 甲醇
92%。8ml H2O+92ml无水甲醇。
A.c 吸附混合物
将等体积的活性氧化镁或吸附性氧化镁No S－120，与硅藻土混合。
A.d 叶红素标准溶液
20mg/L。把100mg α-和β-叶红素天然混合物溶于5－6mlCS2，加35－40ml无水乙醇。在冰箱中冷却约1h确保得到最大晶体，并在硬纸上过滤。把叶红素晶体溶于5－6mlCS2，加40ml石油醚，按上上述冷冻，在硬纸上过滤。在真空干燥器干燥晶体1h。$$准确称出20mg提纯的晶体，并用20ml无水乙醚洗入1L玻璃塞容量瓶。用石油醚继续洗涤，一旦叶红素完全溶解，就加石油醚稀释到刻度。
B 标准曲线制备
将0.0,1.25,2.50,3.75,5.00,6.25,7.5,8.75和10.00ml叶红素标准溶液用石油醚稀释到250ml〔浓度为0.0,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50,0.60,0.70和0.80mg/L〕。在分光光度计或光度计上于436nm处读数。用最小二乘法，各项定义以及注释得到与数据相应的最佳曲线。应用这种方法时，x代表刻度读数，y代表浓度，单位为mg/L。$$标定在同一天制备的储备液。
C 样品制备
在普通咖啡类研磨机中，把通心粉和面条磨成尽可能接近面粉的细度〔含蛋制品不难磨，但平滑通心粉需研磨几次〕。小心不要把机器装得太紧，因为太紧可能产生足够的热而破坏色素。
D 类叶红素总量和叶红素的测定
称20g面粉，粗面粉或通心粉，或100g鸡蛋面条或2g蛋黄放入125ml锥形瓶，加50ml KOH乙醇溶液，在回流冷凝器下在蒸气浴上沸腾30min，偶尔转动瓶子，但尽可能小心，避免样品堆集在瓶壁上。取出瓶，冷却到室温。从洗瓶中用几毫升乙醇将大部分物质转到布氏型中孔烧结玻璃漏斗，用抽滤入250ml吸气瓶中。停止抽滤，用25ml醚冲洗瓶，把洗液倒在玻璃漏斗上，用搅棒搅动物质使醚能与各部分接触。过滤并重复此操作2次。$$把滤液转到250ml玻璃塞分离器，用约25ml醚冲洗，不考虑瓶内肥皂样的物质。加175ml H2O，小心颠倒翻转几次，当分层时，放出下层的水-乙醇液，用25ml醚再萃取该层，弃去下层并把醚加到原来的醚溶液中。倒入50ml H2O洗涤醚层。分层后，分出水层弃去。加50ml石油醚入醚溶液，用5份50ml水洗涤，小心翻转并旋转分离器。将所有水层弃去〔少量乳状液通常在几分钟内变清，可能被弃去，尤其是没有明显的黄色时〕$$将醚-石油醚混合物转入250ml蒸馏瓶，用石油醚冲洗分离器，把烧瓶放入45－50℃H2O的烧杯。塞好瓶，把边臂与真空泵连接，浓缩到大约5ml以除去醚。通过装有含大约3mm无水Na2SO4粉末层的粗烧结玻璃板的Allihn型吸光管，或5.5－7.0cm用Na2SO4半充满的滤纸〔用小的通过瓶颈中的长颈漏斗〕滤入25ml容量瓶中。用冲洗蒸馏瓶所用的而且已经分批通过含Na2SO4滤器的石油醚稀释到刻度，颠倒几次混匀，转入1cm吸收池，在分光光度计上于436nm处测吸光值A。取不少于3个读数。在标准曲线上，由读数平均值计算叶红色素的总量，以ppm表示。如果买不到纯的叶红素标样，对蛋黄将A乘以64.2；对面条，将A乘以13.05，对粗面和通心粉，将A乘以6.25。
E 从叶黄素中分离叶红素
E.a 析相分离叶红素
称20g面粉，粗面粉或通心粉，或100g鸡蛋面条或2g蛋黄放入125ml锥形瓶，加50ml KOH乙醇溶液，在回流冷凝器下在蒸气浴上沸腾30min，偶尔转动瓶子，但尽可能小心，避免样品堆集在瓶壁上。取出瓶，冷却到室温。从洗瓶中用几毫升乙醇将大部分物质转到布氏型中孔烧结玻璃漏斗，用抽滤入250ml吸气瓶中。停止抽滤，用25ml醚冲洗瓶，把洗液倒在玻璃漏斗上，用搅棒搅动物质使醚能与各部分接触。过滤并重复此操作2次。$$把滤液转到250ml玻璃塞分离器，用约25ml醚冲洗，不考虑瓶内肥皂样的物质。加175ml H2O，小心颠倒翻转几次，当分层时，放出下层的水-乙醇液，用25ml醚再萃取该层，弃去下层并把醚加到原来的醚溶液中。倒入50ml H2O洗涤醚层。分层后，分出水层弃去。加50ml石油醚入醚溶液，用5份50ml水洗涤，小心翻转并旋转分离器。将所有水层弃去〔少量乳状液通常在几分钟内变清，可能被弃去，尤其是没有明显的黄色时〕$$将醚-石油醚混合物转入250ml蒸馏瓶，用石油醚冲洗分离器，把烧瓶放入45－50℃H2O的烧杯。塞好瓶，把边臂与真空泵连接，浓缩到大约5ml以除去醚。通过装有含大约3mm无水Na2SO4粉末层的粗烧结玻璃板的Allihn型吸光管，或5.5－7.0cm用Na2SO4半充满的滤纸〔用小的通过瓶颈中的长颈漏斗〕滤入25ml容量瓶中。用冲洗蒸馏瓶所用的而且已经分批通过含Na2SO4滤器的石油醚稀释到刻度，颠倒几次混匀，转入1cm吸收池，在分光光度计上于436nm处测吸光值A。取不少于3个读数。在标准曲线上，由读数平均值计算叶红色素的总量，以ppm表示。如果买不到纯的叶红素标样，对蛋黄将A乘以64.2；对面条，将A乘以13.05，对粗面和通心粉，将A乘以6.25。
E.b 色谱分离叶红素
