中国化工网首页 >> 化工助手 >> 化学物质分析方法数据库
新鲜植物和青饲料中的胡萝卜素
维生素和其它营养物
- 分光光度法
-
A 试剂
A.a 丙酮
干燥，不含醇。以无水Na2SO4脱水干燥并在约10目锌粒上蒸馏。
A.b 市售已烷
沸程67－70℃，在KOH上蒸馏。
A.c 吸附剂
活性氧化镁。
A.d 硅藻土。
B 提取
用剪刀或刀将试样切碎或用食物粉碎机捣碎，以确保样品的代表性。若不立即分析，则将样品于沸水中漂5－10min，冷冻保存。称取2－5g样品于高速捣碎机中，加40ml丙酮，60ml已烷和0.1g MgCO3，捣碎5min，抽滤或沉降，上清液倾泻于分液漏斗内，先用2份25ml丙酮，再用25ml已烷洗涤残余物，合并提取液。用5份100ml水洗去提取液中的丙酮，上层液体转移至盛有9ml丙酮的100ml容量瓶内，用已烷稀释到刻度。必要时也可用乙醇代替丙酮提取，加80ml乙醇和60ml已烷到捣碎机中，其它用量则与用丙酮时相同。
C 色素分离
色谱柱外径22mm，长175mm，下端封接外径10mm管，底部塞入少许玻璃棉或脱脂棉。将活性氧化镁-硅藻土混合物(1+1)轻轻地装入色谱柱至15cm高。色谱柱与抽滤瓶连接，用水泵抽真空。以平头器具〔诸如把带软木塞的棒倒过来或装填棒〕轻压吸附剂并平整表面，〔装柱高度约10cm〕。在吸附剂的上面加1cm厚的无水Na2SO4。$$在抽滤瓶连续抽真空下，将提取液倾入色谱柱，用50ml〔必要时可稍多一些〕丙酮-已烷(1+9)展开，并洗脱可见胡萝卜素。在整个操作过程中吸附剂上面须始终有溶剂覆盖。〔通常将一盛满溶剂的容量瓶倒置于在具颈的柱上，距吸附剂表面1－2cm处，夹住〕。$$收集全部洗脱液，〔胡萝卜素迅速通过色谱柱，而叶黄色、胡萝卜素氧化产物及叶绿素谱带则应在操作完成时仍留在色谱柱上〕将洗脱液〔由于水泵抽真空造成蒸发，而减少了体积〕转移到100ml容量瓶中，并以丙酮-已烷(1+9)稀释到刻度。以分光光度法测定胡萝卜素含量。
D 测定
用分光光度计于436nm或用有适宜滤光系统的仪器尽快测定溶液的吸光度A。$$首先用高纯β-胡萝卜素溶液，依据所示吸收特征曲线校正这些仪器，绘制校正图谱，并由图中将被测溶液的吸光度A换算为胡萝卜素浓度。$$用适当校正过的分光光度计在436nm下测定，则$$C＝〔A×454〕/(196×L×W〕$$式中C为原样中胡萝卜素浓度(mg/lb)；L为比色池长度(cm)；W为最终稀释液中样品的量g/ml；以β-胡萝卜素mg/lb报告结果，此值乘以2.2即为ppm，或乘以1667则为国际单位/lb。
