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药物、食品和饲料中的烟酸和烟酰胺
维生素和其它营养物
- 比色法
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A 试剂
A.a 烟酸标准溶液
A.a.1 贮备液
100μg/ml。将50mg预先干燥并于暗处贮于P2O5干燥器中的美国药典烟酸参比标准溶于25%乙醇中，并使全量为500ml。约10℃下保存。
A.a.2 工作溶液Ⅰ
10μg/ml。取出少许贮备液，让其回到室温，取10ml用水稀释至100ml。作为B(c)的标准溶液。
A.a.3 工作溶液Ⅱ
4μg/ml。如〔2〕所述待贮备液回到室温后，取2ml用水稀释至50ml。作为B(b)和C(a)的标准溶液。
A.b 稀氢氧化铵溶液
5ml NH4OH用水稀释至250ml。
A.c 稀盐酸
1+5。
A.d 磷酸盐缓冲液
pH8。溶解60g Na2HPO4·7H2O和10g KH2PO4于温水中，并稀释至200ml。
A.e 溴化氰溶液
10%。通风橱中制备。在大烧瓶中将370ml水加热至40℃，加40g CNBr振摇至溶解，冷却，稀释至400ml。切勿让CNBr或其溶液溅到皮肤上。冰箱中保存。
A.f 10%对氨基苯磺酸溶液
按每次1ml将NH4OH分次加入20g对氨基苯磺酸与170ml水的混合物中，直至酸溶解为止。用溴甲酚绿指示剂和滴试板检验pH，用HCl(1+1)调节pH至4.5。稀释至200mL。溶液应几乎无色，该溶液供C(a)用。
A.g 55%对氨基苯磺酸溶液
将27ml水和27ml NH4OH加于55g对氨基苯磺酸中，振摇使其溶解。必要时可微微加热。用几滴NH4OH或5N HCl调节pH至7，稀释至100ml，暗处保存。该溶液供C(b)用。
B 样品和标准制备
B.a 药物制剂
加10%对氨基苯磺酸溶液[A(f)]，在通风橱内用滴定管或有机械吸取装置的移液管加CNBr溶液。用工作溶液Ⅱ按如下所述制备各管：$$ $T标准空白/样品空白$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$5.0ml水/5.0ml水$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml稀HCl/0.5ml稀HCl$$标准溶液/样品溶液$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$5.0ml CNBr/5.0ml CNBr$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml水/0.5ml水$T分别制备每个样品的样品空白。$$将标准和样品溶液分别加入相应的试管中，各加入5ml水作为标准空白和样品空白，在一管中按顺序加完所有溶液并测定后再进行下一管的操作。从标准空白开始，旋摇试管，使管内液体旋转，立即加入稀NH4OH，再次旋摇，加入对氨基苯磺酸，旋摇混合，立即加入0.5ml稀HCl，再次混匀，置于光电比色计上，加入对氨基苯磺酸后约30s内，在430－450nm间的任一波长下调节仪器，使其吸光度A为零。象处理标准空白那样加稀NH4OH处理标准溶液，立即旋摇管子，加入CNBr溶液，再次旋摇混匀，加入CNBr30s后，旋摇管子，加入对氨基苯磺酸溶液，再次旋摇，并立即加0.5ml水，再次混匀，塞上塞子。如上所述在仪器已调至标准空白的吸光度A为零的情况下，测定标准溶液的吸光度，当仪器读数达最大时，记下标准溶液的吸光度A。〔加入对氨基苯碘酸约1.5min后，颜色最深，其峰值保持约2min，然后缓慢褪色。〕$$用样品空白调零，同时测定样品溶液的吸光度A。如标准溶液与样品溶液的浓度大致相同，则烟酸含量与吸光度A成正比。
B.b 非谷类食品和饲料
加10%对氨基苯磺酸溶液[A(f)]，在通风橱内用滴定管或有机械吸取装置的移液管加CNBr溶液。用工作溶液Ⅱ按如下所述制备各管：$$ $T标准空白/样品空白$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$5.0ml水/5.0ml水$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml稀HCl/0.5ml稀HCl$$标准溶液/样品溶液$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$5.0ml CNBr/5.0ml CNBr$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml水/0.5ml水$T分别制备每个样品的样品空白。$$将标准和样品溶液分别加入相应的试管中，各加入5ml水作为标准空白和样品空白，在一管中按顺序加完所有溶液并测定后再进行下一管的操作。从标准空白开始，旋摇试管，使管内液体旋转，立即加入稀NH4OH，再次旋摇，加入对氨基苯磺酸，旋摇混合，立即加入0.5ml稀HCl，再次混匀，置于光电比色计上，加入对氨基苯磺酸后约30s内，在430－450nm间的任一波长下调节仪器，使其吸光度A为零。象处理标准空白那样加稀NH4OH处理标准溶液，立即旋摇管子，加入CNBr溶液，再次旋摇混匀，加入CNBr30s后，旋摇管子，加入对氨基苯磺酸溶液，再次旋摇，并立即加0.5ml水，再次混匀，塞上塞子。如上所述在仪器已调至标准空白的吸光度A为零的情况下，测定标准溶液的吸光度，当仪器读数达最大时，记下标准溶液的吸光度A。〔加入对氨基苯碘酸约1.5min后，颜色最深，其峰值保持约2min，然后缓慢褪色。〕$$用样品空白调零，同时测定样品溶液的吸光度A。如标准溶液与样品溶液的浓度大致相同，则烟酸含量与吸光度A成正比。
B.c 谷类制品
取2支试管各加入5ml标准溶液，另取2支试管各加入5ml样品溶泥，再取1支试管加入5ml水作试剂空白，从标准管和样品管中各取一支管分别作为它们的空白，各加入10ml水。将全部试管置于碎冰浴中30min，放入冰箱中则更好。对剩下的标准、样品和试剂空白管，依次加入10ml冷CNBr，30s后跟着加入1.0ml 55%对氨基苯磺酸[A(g)]，每加入一种试剂后立即混匀〔最方便的方法是振摇〕。塞上含CNBr试管的塞子。重新将全部试管放在水浴中，在标准空白和样品空白管中分别加入1.0ml 55%对氨基苯磺酸溶液。用标准空白在470nm处调零，然后在加入对氨基苯磺酸12－15min后，测定其它试管的吸光度A。所有试管均需冷却。试管放入比色计前需揩干。如试管内呈雾状，则可浸入热水中片刻并于测定前揩干。$$用标准减去试剂空白后的吸光度A对烟酸含量(μg/ml)作图，所得标准曲线为一最好的直线。从该直线上可求出经样品空白和试剂空白校正后样品溶液吸光度A相应的浓度C。$$烟酸mg/100g样品＝C/〔10×样品克数〕
C 测定
C.a 药物制品和非谷类食物与饲料
加10%对氨基苯磺酸溶液[A(f)]，在通风橱内用滴定管或有机械吸取装置的移液管加CNBr溶液。用工作溶液Ⅱ按如下所述制备各管：$$ $T标准空白/样品空白$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$5.0ml水/5.0ml水$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml稀HCl/0.5ml稀HCl$$标准溶液/样品溶液$$1.0ml标准溶液/1.0ml样品溶液$$0.5ml稀NH4OH/0.5ml稀NH4OH$$5.0ml CNBr/5.0ml CNBr$$2.0ml 10%对氨基苯磺酸/2.0ml 10%对氨基苯磺酸$$0.5ml水/0.5ml水$T分别制备每个样品的样品空白。$$将标准和样品溶液分别加入相应的试管中，各加入5ml水作为标准空白和样品空白，在一管中按顺序加完所有溶液并测定后再进行下一管的操作。从标准空白开始，旋摇试管，使管内液体旋转，立即加入稀NH4OH，再次旋摇，加入对氨基苯磺酸，旋摇混合，立即加入0.5ml稀HCl，再次混匀，置于光电比色计上，加入对氨基苯磺酸后约30s内，在430－450nm间的任一波长下调节仪器，使其吸光度A为零。象处理标准空白那样加稀NH4OH处理标准溶液，立即旋摇管子，加入CNBr溶液，再次旋摇混匀，加入CNBr30s后，旋摇管子，加入对氨基苯磺酸溶液，再次旋摇，并立即加0.5ml水，再次混匀，塞上塞子。如上所述在仪器已调至标准空白的吸光度A为零的情况下，测定标准溶液的吸光度，当仪器读数达最大时，记下标准溶液的吸光度A。〔加入对氨基苯碘酸约1.5min后，颜色最深，其峰值保持约2min，然后缓慢褪色。〕$$用样品空白调零，同时测定样品溶液的吸光度A。如标准溶液与样品溶液的浓度大致相同，则烟酸含量与吸光度A成正比。
C.b 谷类制品
取2支试管各加入5ml标准溶液，另取2支试管各加入5ml样品溶泥，再取1支试管加入5ml水作试剂空白，从标准管和样品管中各取一支管分别作为它们的空白，各加入10ml水。将全部试管置于碎冰浴中30min，放入冰箱中则更好。对剩下的标准、样品和试剂空白管，依次加入10ml冷CNBr，30s后跟着加入1.0ml 55%对氨基苯磺酸[A(g)]，每加入一种试剂后立即混匀〔最方便的方法是振摇〕。塞上含CNBr试管的塞子。重新将全部试管放在水浴中，在标准空白和样品空白管中分别加入1.0ml 55%对氨基苯磺酸溶液。用标准空白在470nm处调零，然后在加入对氨基苯磺酸12－15min后，测定其它试管的吸光度A。所有试管均需冷却。试管放入比色计前需揩干。如试管内呈雾状，则可浸入热水中片刻并于测定前揩干。$$用标准减去试剂空白后的吸光度A对烟酸含量(μg/ml)作图，所得标准曲线为一最好的直线。从该直线上可求出经样品空白和试剂空白校正后样品溶液吸光度A相应的浓度C。$$烟酸mg/100g样品＝C/〔10×样品克数〕
