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谷类制品中的烟酸和烟酰胺
维生素和其它营养物
- 自动分析法
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A 原理
用Ca(OH)2从谷类制品中提取烟酸和烟酰胺，吡啶基团被CNBr裂解，再与对氨基苯磺酸反应生成黄色络合物，于470nm下测定其吸光度A。
B 仪器和试剂
B.a 自动分析仪
AAⅡ型自动分析仪配有下列组件：进样器Ⅳ，比例泵，具470nm滤光片的比色计，记录仪和116-D137复式接头。见图24-2。
B.b 溴化氰溶液
10%。
B.c 磷酸盐缓冲液Ⅰ
pH8。
B.d 磷酸盐缓冲液Ⅱ
pH8。将60g Na2HPO4·7H2O和10g KH2PO4溶于温水中，稀释至2L。加1ml Brij-35，混匀。
B.e 对氨基苯磺酸溶液
10%。加100g对氨基苯磺酸至盛有500ml水的烧杯中，用电磁搅拌混合，缓慢加入NH4OH直至酸溶解完为止〔约40ml〕，用HCl(1+3)调节pH至7，稀释至1L。
B.f 烟酸标准溶液
B.f.1 贮备液
B.f.2 工作溶液
25μg/ml。取少量贮备液并让其回到室温，吸取25ml用水稀释至100ml。
B.f.3 校正溶液
2.5μg/ml。取10ml工作标准溶液用水稀释至100ml。
C 样品和标准制备
在整个测定过程中，随同样品一起配制4种浓度的工作标准溶液：取4个250ml锥形烧瓶，分别加入1.5g Ca(OH)2，再用移液管分别加入5，10，15和20ml工作标准溶液。精确称量约5g〔含约150－400μg烟酸〕的样品于另一加有1.5g Ca(OH)2的烧瓶中，加水使各个烧瓶中溶液体积约为90ml，振摇混匀，置于高压釜内于104kPa压力下加热2h，趁热混匀。冷至40℃后，转移到100ml容量瓶中，加一滴Brij-35，并稀释至刻度。$$从每个容量瓶中取出约35ml上清液到离心管中，将各管置于冰浴15min或冰箱内2h分别从每个离心管上取上层清液20ml加于另一离心管内，各加2ml磷酸盐缓冲液(Ⅰ)，混匀，用滤纸过滤。
D 测定
整个过程应于通风橱内操作，如不可能，则应采取如下措施，以使CNBr烟雾减少到最低限度。从冰箱中仅取出部分CNBr〔通常取100ml装入100ml容量瓶就足够了〕。将管子〔最好是聚乙烯管〕插入容量瓶中，开口处用铝箔封起来。从流通池引出的废液管悬插入装有约100ml 25%NaOH的1L锥形瓶中，用湿纸布封住瓶口。泵送所有试剂通过系统确立稳定的基线。调节比色计上的控制钮使2.5μg/ml标准液〔250μg/100ml〕达记录仪量程的50%。按下列顺序装入样杯：标准，样品，每装10个样品后装1个2.5μg/ml标准液。对于大多数样品系统中的渗析器导致了低的空白。按以下步骤测定空白：将CNBr管插入水中并冲洗至系统无CNBr为止〔约30min〕，其余各管插入相应的试剂中，控制钮置于分析时的位置。建立稳定基线并按分析时的相同顺序重复测定样品和标准。
E 计算
用标准减去空白后的吸光度A〔记录纸单位〕对烟酸浓度〔μg/ml〕作图所得标准曲线为一最合适的直线。由些求出经空白和操作中基线漂移校正后的样品吸光度A相应的浓度C。$$对于稀释至100ml的样品和标准$$烟酸mg/100g＝C/〔10×样品克数〕$$式中C＝〔μg/ml〕×100。
