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复合维生素制品中的烟酰胺
维生素和其它营养物
- 分光光度法
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A 原理
烟酰胺可在pH约为4.5条件下用KH2PO4提取，并能与CNBr和巴比土酸反应，用分光光度法测定其反应产物，在烟酸浓度不高于3倍烟酰胺浓度时，烟酸的存在对测定无干扰。
B 试剂
B.a 溴化氰溶液
10%。
B.b 磷酸二氢钾溶液
B.b.1 3%
用水溶解30gKH2PO4并稀释至1L。
B.b.2 0.3%
溶液〔1〕与水按(1+9)混合。
B.c 巴比土酸缓冲液
按每100ml 3%KH2PO4溶液中加入2g试剂级巴比土酸的比例，制备每批分析所需缓冲液用量。机械搅拌1h，用前过滤。
B.d 烟酰胺标准溶液
B.d.1 贮备液
250μg/ml。将50g烟酰胺参比标准用60%乙醇溶解并稀释至200ml。约10℃下保存。
B.d.2 工作液
5μg/ml。取少许贮备液温热至室温，用3%KH2PO4溶液稀释2ml贮备液至100ml。
C 样品制备
取5片药片或胶囊或适量液体样品供每次测定用。将药片研磨成细粉。把准确称量的样品放入锥形瓶中，〔对密封明胶胶囊，加约2ml氯乙烯协助分散。〕加入0.3% KH2PO4溶液，其加入量以ml计至少等于估计所含烟酸按毫克数的2倍。如样品不易溶解，则可振摇分散，并于沸水浴或高压釜内于104kPa压力下加热15min，用0.3% KH2PO4溶液稀释至约5μg/ml，必要时可过滤。
D 测定
用水代替CNBr分别制备各个样品的空白。将1ml工作标准液或测定液置于分光光度计比色管中，加入0.5ml CNBr溶液，混匀，塞上塞子，静置25－30min。〔分析多份样品时，为防止静置时间超过30min，各管加CNBr时有规则地间隔1－2min。〕加入10ml巴比土酸溶液，旋转振摇。〔若30min后尚未加巴比土溶液，则将比色管置于碎冰浴中，以稳定CNBr反应。〕$$用水代替CNBr作相应空白并于550nm调节分光光度计使吸光度A为零。在最大显色时〔加入巴比土酸溶液后约2－4min，颜色最深，稳定约1min，然后慢慢褪去〕测定反应产物的吸光度A。$$原样品中烟酰胺mg＝〔A×5×稀释倍数〕/(A'×1000)，式中A和A'分别为样品和标准的吸光度，5为每毫升工作标准液中所含烟酰胺的μg数。以烟酰胺mg/片〔胶囊，克或ml液体〕报告结果。
