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食品中的维生素C〔总量〕
维生素和其它营养物
- 半自动荧光测定法
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A 装置
A.a 自动分析仪
自动分析仪Ⅱ系统按图24-4所示流程图装配。
A.b 荧光计
装有流通池和4瓦灯的Aminco荧光比色计。
A.c 荧光计滤光片
第一滤光片7－60，在356nm处谱带透光度T为70%；第二滤光片在440nm处谱带透光度T为40%。
A.d 移液管
P-5000型。
A.e 收集漏斗。
A.f 塑料杯。
A.g 捣碎机。
A.h 磁力搅拌器。
A.i 机械振荡器
曲柄式振荡器。
A.j 分配移液管。
B 试剂
B.a Brij溶液
35%Brij水溶液。
B.b 提取溶液
40%偏磷酸-甲醇溶液(3+1，pH2.1〕，每周重新配制。
B.c 洗液
于1L提取溶液中加入1.5ml Brij溶液并过滤。
B.d 渗析接受液
1.5ml Brij溶液/LH2O。
B.e 醋酸钠溶液
B.e.1
将302g无水醋酸钠溶于水中并稀释至1L。加入1.5ml Brij溶液，过滤。
B.e.2
制备如〔1〕的溶液，用HCl调节pH值至下述硼酸溶液的pH〔约6.9〕。
B.f 硼酸
在100ml醋酸钠溶液〔1〕中溶解5g硼酸。每天制备。
B.g 邻苯二胺二盐酸盐
0.5mg/ml。用水溶解50mg邻苯二胺二盐酸盐并稀释到100ml。每天配制。
B.h 酸洗过的活性炭
将1L 10% HCl(1+9)加至200g活性炭中，加热至沸腾，真空过滤。将滤饼移入大烧杯中。加1L水，搅拌，过滤。再用水重复洗涤与过滤。在110－120℃下干燥过夜。
B.i 活性炭浆
将20g酸洗过的活性炭加至提取溶液中并稀释到100ml。将该浆液移至125ml配有磁力搅拌器的锥形瓶中。以均匀的速度搅拌混合该浆液。
B.j 抗坏血酸标准液
B.j.1 1.0mg/ml
准确称量100mg抗坏血酸〔存于干燥器内〕加至100ml的容量瓶中，用提取溶液溶解并稀释至刻度。
B.j.2 100μg/ml
吸取10ml上述溶液，至100ml容量瓶内，用提取溶液稀释至刻度。
B.j.3 2，10，25μg/ml
吸取2，10和25ml 100μg/ml的溶液分别加至100ml的容量瓶中，用提取溶液稀释到刻度。
C 标准曲线
向每个工作标准溶液〔2，10，25μg/ml〕中加入1ml活性炭〔含0.2g活性炭〕振荡并将每个容量瓶中的样品移至塑料杯中，机械振荡10min。将混合物过滤并立即将滤液由DisPo漏斗移至自动分析仪的取样器中，用泵打入仪器。调节记录器使对于25μg/ml标准溶液达满刻度〔最大峰值〕。泵送其它标准溶液通过仪器。
D 样品制备
D.a 低水份样品
将样品研磨后过40目筛。准确称取约含1.5mg抗坏血酸的一份样品〔最多5g〕置于塑料杯中，并分散在100ml提取溶液中。加1ml活性炭浆液，加盖，振荡10min。过滤，将滤液泵入自动分析仪。
D.b 高水份样品〔水果和蔬菜〕
将样品研磨后过40目筛。准确称取约含1.5mg抗坏血酸的一份样品〔最多5g〕置于塑料杯中，并分散在100ml提取溶液中。加1ml活性炭浆液，加盖，振荡10min。过滤，将滤液泵入自动分析仪。
D.c 脱氢抗坏血酸
将样品研磨后过40目筛。准确称取约含1.5mg抗坏血酸的一份样品〔最多5g〕置于塑料杯中，并分散在100ml提取溶液中。加1ml活性炭浆液，加盖，振荡10min。过滤，将滤液泵入自动分析仪。
D.d 空白测定
用硼酸溶液代替调节pH的醋酸钠。将标准液及样品泵入，通过流动系统，得到空白值。
E 计算
标准溶液峰高减去空白对浓度作图。通过每个样品经空白校正过的峰高与标准曲线相比较，得到样品浓度，μg/ml。如果在样品及标准溶液的计算中都略去由于加活性炭浆液造成的1ml的稀释的话，则不会引入误差。原始样品中总的维生素C或脱氢抗坏血酸的量如下：$$维生素C，mg/100g＝(C/W)×10$$式中C为由标准曲线得到的抗坏血酸或脱氢抗坏血酸的浓度，μg/ml；W为样品重量，g；10是100ml提取液计算成报告中以每100g样品中所含的浓度以及由μg换算成mg的复合因子。
