生意宝 | 全球化工网 | 韩国化工网 | ChinaChemNet·免费注册 ·用户登录 ·服务中心 
  • 中国化工网首页 >> 化工助手 >> 化学物质分析方法数据库


    维生素制剂中的维生素D

    维生素和其它营养物

    比色法
        
    A 原理
        根据制剂是否含有油类,是否有其他脂溶性维生素存在以及维生素D的浓度要求特定的步骤,见表24-1所示。
    A.a 不含其他维生素的维生素D浓缩物
        按G制备的样品残留物,含有约2.5mg维生素D〔100,000IU〕,并溶于10.0ml 0.1%BHT溶液中B(p)。分别吸取此溶液4ml至2个10ml容量瓶中,向其中一个瓶中加入2ml 10%马来酸酐溶液B(m)(1),将塑料管置于瓶颈上,充以氮气并用弹簧夹夹住管子。在100℃水浴上于暗处加热3h,冷却,用0.1%BHT溶液稀释溶液〔用马来酸酐处理及未处理过的溶液〕,并定容。定量转移未处理的溶液至200ml容量瓶中且用0.1%BHT溶液稀释定容。按J(b)加显色剂采用比色法测定处理过的及未处理的稀释溶液的吸光度A。$$残留物色值(%)=5×(A/Au)$$式中A及Au分别表示处理过的和未处理过的稀释溶液的吸光度A。当残留物色值小于等于5%,则被认为异速甾醇可忽略不计。
    A.b 复合维生素制剂中的维生素D
        将制剂皂化并提取,未皂化物在磷酸盐处理过的氧化铝色谱柱上层析,成功的除去可能存在的生育酚、胡萝卜素及BHT;在聚乙二醇600-ChromosorbW及Florex上除去可能存在的维生素A,纯化了的样品用马来酸酐处理以除去无生物活性的反式异构体。维生素D与三氯化锑反应后进行比色法测定,对仍然存在于最后溶液中的维生素A分解产物的干扰应加以校正。
    B 试剂
        
    B.a 溶剂
        大于等于95%Ac2O,乙醇,无甲苯的苯,无过氧化及酸的乙醚,无酸的异辛烷,无过氧化物及酸的聚乙二醇600及无酸的甲苯。
    B.b 石油醚
        在颗粒状KOH上回流,收集40℃至60℃的馏分。
    B.c 乙醚-石油醚洗脱液
        石油醚中8%和30%的醚。
    B.d 二氯乙烯
        按下述方法提纯试剂级产品。将1L二氯乙烯与50g粒状KOH及约50cm^2^铝箔回流2h,除去KOH及铝,加5g粉末状P2O5与二氯乙烯振摇并蒸馏〔沸点82℃),弃去50ml初馏液。
    B.e 乙酰氯
        有安瓿瓶包装,溶液应无色并新鲜重蒸过。
    B.f 色谱柱材料
        
    B.f.1 氧化铝。
        
    B.f.2 磷酸氢二钠
        Na2HPO4·2H2O。
    B.f.3 硅藻土
        酸洗。
    B.f.4 粒状硅藻土
        过筛,保留150-250μm部分。
    B.f.m 马来酸酐溶液
        
    B.f.m.1 贮备液
        10%。10g马来酸酐〔蒸馏过,沸点196℃〕溶解于100ml甲苯中〔澄清溶液,稳定约一个月〕。
    B.f.m.2 工作液
        1%,临用前取部分贮备液用甲苯稀释得到1%溶液。
    B.f.n 显色剂
        按下述方法制备两种贮备液:
    B.f.n.1 A液
        约110g SbCl3〔干燥、结晶,必要时蒸馏〕溶解于400ml二氯已烷,加入约2g无水氧化铝,混匀,经滤纸过滤到500ml容量瓶中,用二氯已烷稀释至刻度并混匀。此液置于2cm比色池中,用分光光度计在500nm处测定溶液A,以二氯已烷作对照液,其吸收值A应小于等于0.070。
    B.f.n.2 B液
        在通风橱中将100ml无色蒸馏过的AcCl与400ml二氯已烷混合,于低温贮存。$$取90ml A液与10ml B液混合,贮于棕色玻璃瓶中,在7天内使用。如出现颜色即弃去。
    B.f.o 维生素标准
        麦角钙化〔甾〕醇的美国药典参比标准〔如果样品标明含维生素D2〕或胆钙化〔甾〕醇〔如果样品标明含维生素D或D3〕。准确称取钙化醇参比标准约25mg溶于含有0.5mg丁基化羟基甲苯/ml的100ml 20%甲苯的异辛烷溶液中。如在室温暗处贮存此溶液,稳定期小于1个月。分析当天,吸取2ml浓标准液置于100ml容量瓶中,用20%的甲苯异辛烷稀释到刻度。
    B.f.p 丁基化羟基甲苯溶液
        0.1%甲苯溶液。
    B.f.q 乙氧基喹溶液
        0.05mg/ml的石油醚溶液。
    B.g 颜色抑制液
        异辛烷-甲苯-醋酐(1+1+1)。
    B.h 抗坏血酸钠溶液
        20%。将3.5g抗坏血酸溶解于20ml 1N NaOH溶液中,每日新鲜制备。
    B.i 氢氧化钾溶液
        3%,6%(w/v)及50%(w/v)水溶液。
    B.j 焦性培酚溶液
        20%。将20g溶于乙醇中并用乙醇稀释至100ml。
    B.k 硫化钠溶液
        10%。将12g Na2S·9H2O溶解于20ml水中,并用87%的甘油稀释至100ml。
    B.l β-胡萝卜素溶液
        0.01%。溶剂为异辛烷。
    C 色谱柱Ⅰ
        
    C.a 色谱管
        20〔内径〕×150mm管的下端密封粗的烧结玻璃圆盘,管上部为250ml的球状物,在下端配以聚四氟乙烯活塞与缩口部分底端密接。
    C.b 磷酸盐处理氧化铝的制备与脱活性
        
    C.c 柱的制备
        将40ml石油醚加至脱活氧化铝中,旋摇并用石油醚转移至管中,任其沉降。整个分析过程中保持柱顶有大于等于0.5cm液体,且用N2调节流量为4-5ml/min,〔用磷酸盐处理过的氧化铝柱只能用1次〕。
    D 色谱柱Ⅱ
        
    D.a 色谱管
        将20mm〔内径〕×300mm管下端〔约5cm〕收缩至8mm直径,于收缩处嵌入粗的烧结玻璃圆板,用聚四氟乙烯活塞安置在收缩部分。
    D.b 聚乙二醇600-ChromosorbW混合物的制备
        称取10g聚乙二醇600至1L带有玻璃塞的锥形瓶中,并溶解在100ml苯中。加入20g酸洗过的ChromosorbW并旋摇。将300ml石油醚少量分次加入,剧烈旋转使之混匀。静置沉降,倾出上清液,用2份各100ml石油醚洗涤浆状物,每次倾去上清液。
    D.c 柱的制备
        吸取每毫升中含有5mg结晶胆钙化醇〔或麦角钙化醇〕的石油醚溶液10ml加到柱子中,按H(a)或(b)洗脱。收集洗脱液于250ml圆底烧瓶中,在约40℃左右水浴中真空条件下蒸发至干。按同样方法蒸发10.0ml未经处理的钙化醇溶液。冷却,通氮恢复大气压,不能拖延,立即分别将每一残留物溶解于10.0ml 20%甲苯的异辛烷溶液中,并按下述方法测定:吸取2ml移至2cm比色池,用快速移液管加入5ml显色剂并混匀。以2ml 20%甲苯异辛烷溶液与5ml显色剂为对照空白于500nm下测定A。$$%性能=100(A/Ar)此处A与Ar分别指经过层析与未经层析的溶液的吸光度值A。$$此柱性能试验可一起用于检验3个柱子。性能试验的应该在97%至103%之间;否则需再次用不同量的H2O使柱填料重新脱活并重新检查柱性能。
    E 色谱柱Ⅲ
        
    E.a 色谱管
        用与柱Ⅰ同样的管子。
    E.b Florex的制备及脱活
        吸取每毫升中含有5mg结晶胆钙化醇〔或麦角钙化醇〕的石油醚溶液10ml加到柱子中,按H(a)或(b)洗脱。收集洗脱液于250ml圆底烧瓶中,在约40℃左右水浴中真空条件下蒸发至干。按同样方法蒸发10.0ml未经处理的钙化醇溶液。冷却,通氮恢复大气压,不能拖延,立即分别将每一残留物溶解于10.0ml 20%甲苯的异辛烷溶液中,并按下述方法测定:吸取2ml移至2cm比色池,用快速移液管加入5ml显色剂并混匀。以2ml 20%甲苯异辛烷溶液与5ml显色剂为对照空白于500nm下测定A。$$%性能=100(A/Ar)此处A与Ar分别指经过层析与未经层析的溶液的吸光度值A。$$此柱性能试验可一起用于检验3个柱子。性能试验的应该在97%至103%之间;否则需再次用不同量的H2O使柱填料重新脱活并重新检查柱性能。
    E.c 柱子的制备
        将20ml石油醚加入烧瓶中,转动并用石油醚转移Florex至管中,让其沉淀。用管塞调节流量为2ml/min。以50ml异辛烷洗涤并弃去洗脱液。在整个分析过程中,维持柱顶有1cm液体。
    F 柱性能试验
        
    G 样品制备
        
    G.a 步骤A,油中不皂化物质的分离
        
    G.b 步骤B,从粉剂、胶囊、片剂及水悬浮剂中分离不皂化物
        因子m,n及r按(a)与(b)中规定的。$$对于不含其他维生素的浓缩物,从(a)或(b)的苯溶液的等分试样中用苯或石油醚准确地稀释到其容积的r倍。吸取50ml含50μg(2000IU)维生素D置于圆底烧瓶中,按照(c)蒸发,且立即按I继续操作。$$对于多种维生素制剂的浓缩物,从(a)或(b)的苯溶液的等分试样中,用苯或石油醚准确地稀释至其容积的r倍。吸取75ml含75μg〔3000IU〕维生素D置于圆底烧瓶中,加入1ml乙氧基喹溶液,按照(c)蒸发,并立即按H继续操作。$$对于低效价多种维生素制剂,分别从(a)或(b)的苯溶液的等分试样中,吸取m×75.0ml或n×75.0ml含有75μg〔3000IU〕维生素D,置于圆底烧瓶中,加入1ml乙氧基喹溶液。按照(c)蒸发,立即按照H继续操作。$$对于不含其他维生素的低效价制剂,吸取含有50μg(2000IU)维生素Dm×50.0ml或n×50.0ml,置于圆底烧瓶中,在小于40℃的水浴上,旋转真空蒸发至干,冷却。通氮恢复常压,立即按照H继续操作。
    G.c 步骤C,罐装维生素D树脂的制备
        
    G.d 步骤D,不皂化物的等分试样制备
        
    H 柱色谱法
        
    H.a 步骤E,氧化铝
        用3.00ml异辛烷溶解来自(a)的残留物,让溶剂从色谱柱Ⅱ流出,使溶剂的弯月面正好达到柱子的上表面,吸取2ml样品加到柱子上。当溶液弯月面达到柱子上表面,加入1ml异辛烷,且流经柱子洗脱,重复这种洗脱2次。当最后部分的异辛烷进入柱子时,从滴液漏斗继续加入异辛烷,或每次加入10ml,保持流量约为2ml/min。让洗脱液排至柱Ⅲ,调节活塞保持柱Ⅲ表面上有1cm高的溶液,色谱分离期间不时用便携式的紫外灯在紫外光为360nm处小于等于1s检测柱Ⅱ。当带有荧光的维生素A谱带前缘位于离柱Ⅱ底部3cm时停止洗脱,移去柱Ⅱ。维生素D在柱Ⅲ上,弃去柱Ⅲ的洗脱液,用异辛烷从柱Ⅱ上洗脱全部维生素A。柱Ⅱ现时准备进行另一个维生素D的测定。$$用150ml苯洗脱柱Ⅲ,收集洗脱液于圆底烧瓶中,加入1ml乙氧基喹溶液,在40℃真空蒸发至干,冷却通氮使之恢复常压,立即继续操作。
    H.b 步骤F,聚乙二醇600-ChromosorbW及Florex
        用3.00ml异辛烷溶解来自(a)的残留物,让溶剂从色谱柱Ⅱ流出,使溶剂的弯月面正好达到柱子的上表面,吸取2ml样品加到柱子上。当溶液弯月面达到柱子上表面,加入1ml异辛烷,且流经柱子洗脱,重复这种洗脱2次。当最后部分的异辛烷进入柱子时,从滴液漏斗继续加入异辛烷,或每次加入10ml,保持流量约为2ml/min。让洗脱液排至柱Ⅲ,调节活塞保持柱Ⅲ表面上有1cm高的溶液,色谱分离期间不时用便携式的紫外灯在紫外光为360nm处小于等于1s检测柱Ⅱ。当带有荧光的维生素A谱带前缘位于离柱Ⅱ底部3cm时停止洗脱,移去柱Ⅱ。维生素D在柱Ⅲ上,弃去柱Ⅲ的洗脱液,用异辛烷从柱Ⅱ上洗脱全部维生素A。柱Ⅱ现时准备进行另一个维生素D的测定。$$用150ml苯洗脱柱Ⅲ,收集洗脱液于圆底烧瓶中,加入1ml乙氧基喹溶液,在40℃真空蒸发至干,冷却通氮使之恢复常压,立即继续操作。
    I 速甾醇脱活
        
    I.1 步骤G,马来酸酐的加入
        将来自G(c)或(d)或H(a)或(b)的残留物,最好含约2000IU维生素D,溶于2.00ml 1%马来酸酐溶液中,并置于圆底烧瓶中,塞好瓶塞,旋摇,让其在室温暗处放置30min,用滴定管或移液管加入8.0ml异辛烷至溶液中〔制备样品〕。
    J 比色测定
        
    J.a 步骤H,多种维生素样品的制备
        取3只相匹配内径为20mm的比色管,并分别标记1,2及3号。吸取2ml按I制备的样品,置于管1中,取2ml标准溶液置于管2中,又取1ml制备的样品及1ml显色抑制剂置于管3中,最好用自动移液管很快地往每个比色管中加入5.0ml显色剂并混匀,从加入显色剂起准确计时,达45s后,用分光光度计在500nm处测定3个溶液的吸光度A。以2ml 20%甲苯的异辛烷溶液和5ml显色剂作空白试验。每个溶液在第一次读数后45s,于550nm处测第二次读数。〔注:有些批号的显色剂在45s后显色才达最大值,首先用标准制剂检查核对,其它批号是在45-120s后显色达最大值。采用达到显色最大值的准确时间,并在45s后于550nm进行测定〕。设A分别以A^^1(500)^^,A^^2(500)^^,A^^3(500)^^表示,A^^1(550))^^,A^^2(550))^^及A^^3(550))^^标明吸光度A,其中的脚注号表示管号,括号内数字表示波长。$$用以下公式计算每克样品、胶囊、或片剂中维生素D的含量μg或IU/ml:$$效价=C×(Vs/W)×(A^^D^^/A^^2(500))^^)$$式中C=每毫升标准溶液中胆钙化醇或麦角钙化醇量,μg或IU/ml,(1μg=40IU),W=样品量g或胶囊数或片剂数。Vs=样品的最终体积(r×20ml),r=样品G(a),(b) 和(d)的稀释因子。A^^D^^为$$A^^D^^=[q/(q-P)]×A^^1^^(500)-[1/(q-p)]×A^^1^^(550)$$式中P=A^^2^^(550)/A^^2^^(500);q1=A^^3^^(550)/A^^3^^(500)$$在带宽小于等于10nm的分光光度计中,在550nm处标准溶液的吸光度A,可忽略不计。而P<0.1对这分光光度计A^^D^^=A^^1^^(500)-(A^^1^^(550)/q)。如果q<1,为避免系统误差,它应取作1。
    J.b 步骤I,不含其他维生素样品的制备
        
    K 浓缩物一致性的确证
        
    其他库:化学品法规 国家标准 化学品安全数据库(msds) 外贸常识 合同范本 报关指南 商检指南 国际区号 国家代码