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食品和饲料中α-生育酚及α-生育酚醋酸酯
维生素和其它营养物
- α-生育酚的比色法
- 〔方法(a)仅适用于Beckman分光光度计且脂肪含量低的样品。(b)可适用于在比色管中工作体积小于等于6ml的任一分光光度计，样品可以含有相当量的脂肪。〕
a 薄层色谱后的比色法
〔薄层色谱方法对环境湿度敏感〕根据环境相对湿度处理氧化铝板及选择溶剂系统，使得α-生育酚的R^^f^^值为0.5－0.7。$$使用微量移液管，缓慢地定量转移10μl标准溶液〔10μgα-生育酚)至氧化铝板距下端及左侧边2cm处以形成小的斑点。用少量乙醚冲洗微量移液管并加到点上，点样时用氮气吹干点样点。$$立即将薄层板放入展开槽用前述第一相溶剂系统作第一相展开。展开至溶剂前沿至薄层板底移动约15－16cm处。从展开槽取出薄层板，用氮气吹干。将薄层板反时针方向旋转90度，立即放入第二个展开槽，用前述第二相溶剂展开，直至溶剂前沿距底边约15－16cm处为止。$$从展开槽中取出薄层板，吹氮气干燥，轻轻喷上二氯荧光黄乙醇溶液，当薄层板完全干燥〔约5min〕，在紫外光下判明生育酚斑点位置〔注意：过量照射紫外光可以破坏生育酚〕。$$圈出生育酚斑点〔允许安全边缘距斑点约5mm〕并圈出未点样但同样喷过显色剂的薄层板上圈出同样大小的圈点作空白。切出此二斑点分别置于含1.4ml红菲绕啉溶液(g)的25ml小玻瓶中，盖上盖子旋摇，让其静置洗脱15min，按G进行比色测定。$$回收因子(s)＝薄层板上回收的α-生育酚μg/作为样品所取的生育酚μg〔回收因子在同一个实验室内应为常数，其变化范围可以从约75%至85%〕
b α-生育酚或总的还原物的比色法
选择匹配的比色管装入60ml石油醚(a)(2)-无水乙醇(3+2)整个比色过程中保持恒定的弱光条件。
b.1 校正曲线
准确将含5μg纯α-生育酚4ml石油醚(a)(2)-无水乙醇(3+2)，置于25ml小玻瓶中。准确加入1.0ml红菲绕啉溶液，旋摇。准确滴加0.5ml FeCl3溶液并旋摇。在加完最后一滴FeCl3溶液后的正15s时，准确加入0.5ml H3PO4溶液，并旋摇，3min后显色，形成的颜色稳定90min。$$将溶液转移至匹配的比色管中，在分光光度计上于534nm处，以同样的方法制备的不加α-生育酚的试剂空白对照测定A值。$$用5－50μgα-生育酚重复步骤5次。以A对α-生育酚μg/6ml在线性坐标纸上作图。通过原点及6个点作出最合适的平滑曲线。每天检查校正曲线。当用新的试剂溶液时需绘制新的曲线。
b.2 比色测定
准确将含5μg纯α-生育酚4ml石油醚(a)(2)-无水乙醇(3+2)，置于25ml小玻瓶中。准确加入1.0ml红菲绕啉溶液，旋摇。准确滴加0.5ml FeCl3溶液并旋摇。在加完最后一滴FeCl3溶液后的正15s时，准确加入0.5ml H3PO4溶液，并旋摇，3min后显色，形成的颜色稳定90min。$$将溶液转移至匹配的比色管中，在分光光度计上于534nm处，以同样的方法制备的不加α-生育酚的试剂空白对照测定A值。$$用5－50μgα-生育酚重复步骤5次。以A对α-生育酚μg/6ml在线性坐标纸上作图。通过原点及6个点作出最合适的平滑曲线。每天检查校正曲线。当用新的试剂溶液时需绘制新的曲线。
