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药品中的维生素E
维生素和其它营养物
- 气相色谱法
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A 仪器
A.a 气相色谱仪
具有氢焰或β-氩离子检测器；具有适用的玻璃柱和涂衬玻璃的样品导入系统或柱上进样器。典型操作条件：温度〔℃〕－柱温270－285，进样系统295，检测器295；用氮气或氩气作载气，调节流速使α-生育酚醋酸酯在23－27min出峰；满意的记录仪纸速为0.33"/min；β-Ar检测器电压为900V直流电。
A.b 过滤装置
包括过滤器支架及微纤维玻璃初滤圆盘；和过滤器。
B 试剂
B.a 正已烷
纯级。
B.b RRR-或全外消旋α-生育酚。
B.c RRR－或全外消旋醋酸-α-生育酚。
B.d RRR-或全外消旋-生育酚-氢-琥珀酸酯。
B.e 内标溶液
将500mg十六烷基棕榈酸酯或用500mg三十二烷基替代，溶解在正已烷中，置于500ml容量瓶中，用正已烷稀释定容。
B.f 维生素E标准溶液
制备所需的维生素E类似的参比标准。将100mg类似物移至100ml容量瓶中，用内标液或正已烷溶解稀释并定容〔用于外标法〕。将所有标准溶液置于棕色硬质玻璃容量瓶中，在氮气中冷冻保存。
C 色谱柱的制备
将5%SE-30涂于100－120目Gas-Chrom Q载体，将其填充于2.4(8')×4mm〔内径〕〔均匀孔径〕的硬质玻璃管内。且充填在进样点的10cm和柱出口的2.5cm以内。充填时振动柱子，在柱进口的载气入口顶端和出口处的填料与活塞间分别塞入玻璃棉。$$在285℃和载气流量为80ml/min下老化柱子24h。通气情况下让柱子冷却。将柱出口与检测器连接。将色谱仪升到操作温度和操作的载气流量，记录基线以检查仪器的稳定性。在30min内基线漂移应小于等于1%。$$〔有时色谱柱在直接进样后1－4h内呈现不稳定，遇有这种情况或是升高柱温以便短时间内赶走样品中的污染物或是等到色谱柱在操作温度下基线稳定。〕
D 样品的制备
D.a 片剂
在研钵中研磨并每次用25ml正已烷提取共四次。通过过滤装置进入接受器。
D.a.1 内标法
在氮气流中蒸发已烷，用内标液稀释使之最终浓度为1mg维生素E/ml。
D.a.2 外标法
按照标鉴标示量为基础，使之最终浓度为1mg维生素E/ml。
D.b 胶囊
在研钵中研磨并每次用25ml正已烷提取共四次。通过过滤装置进入接受器。
D.c 注射剂与液体
用内标溶液稀释〔内标法〕或以正已烷稀释〔外标法〕使之最终浓度为1mg维生素E/ml。如果样品与正已烷不混溶，则直接取样向色谱柱中注入一定量的样品(μl)和用外标法进行测定。
D.d 其他制剂
在研钵中研磨并每次用25ml正已烷提取共四次。通过过滤装置进入接受器。
E 注样技术
E.a 内标法
注样技术不是关键。
E.b 外标法
用10μl Hamilton微量注射器采用下列注样技术：抽取1μl空气至针筒，将针头插入样品中，抽取所需要量样品至针筒，将针头从溶液中移去，再抽1μl空气至针筒。检查在刻度上同样μl范围间的样品，每次所得样品应确保进样体积一致。
F 性能检查
用观察α-生育酚与α-生育酚醋酸酯峰的分离来监测仪器与柱的性能，用峰的分辨率表示。峰分辨度＝2D/(B+C)，式中D＝两类似物峰最高点间的距离，B＝α-生育酚醋酸酯峰底宽，C＝α-生育酚峰底宽。$$用等量的α-生育酚与醋酸α-生育酚混合物测定上述各项数值。所采用的进样量应使峰高约为满量程的50%，如果分辨度大于等于1.0，则色谱柱和仪器是满意的。所有色谱柱峰分辨度都将显示逐渐下降。当分辨度的值小于1.0则重新安装新柱。
F.a 内标法
注入一定量〔通常为2－5μl〕，标准溶液(s)，使维生素E类似物及内标物产生的峰高约为满量程的50%来校正仪器。用积分仪测量类似物(s)及内标液的峰面积，或以峰高乘半峰宽测量类似物和内标峰面积，记录灵敏度及保留时间。计算相对的响应因子RF。标准溶液的RF＝(Qs/Qd)，式中Qs与Qd分别为特定维生素E类似物和内标物的峰面积。重复校正至3次连续进样RF值恒定〔在2%以内〕，其他参数也稳定。对每个有关的维生素E类似物要重复校正。
F.b 外标法
对每个有关的类似物，每天制备2－5μg的标准曲线。以响应的面积对进样μg数作图，对每个要测定的类似物采用大于等于3点的平行实验重复测定二次。
G 峰的鉴别
比较样品与标准液的保留时间，按下述方法区别，样品提取液中α-生育酚与α-生育酚-氢-琥珀酸酯〔这些维生素E类似物有相似的保留时间〕；得到气相色谱分析的提取液。加入1ml醋酐-吡啶(2+1)至提取液中振摇10min，在氮气流中蒸发溶液。用正已烷稀释至原体积作气相色谱分析用。如果峰移向醋酸α-生育酚位置，则样品中含有乙醇；如果峰不迁移，则样品中含α-生育酚-氢-琥珀酸酯。相对保留时间为：醋酸α-生育酚1.0；α-生育酚0.9；α-生育酚-氢-琥珀酸酯0.9。$$在内标法中分别相应于十六烷基棕榈酸酯和三十二烷保留时间为：α-生育酚0.53和0.75；α-生育酚-氢-琥珀酸酯0.54和0.76；α-生育酚醋酸酯0.62及0.86。
H 测定
H.a 内标法
注入一定体积的按标鉴标示量制备的样品溶液以便得到可与[F(a)]标准溶液可比较的预期响应值。测量维生素E类似物〔S〕和内标的峰面积。$$维生素E类似物mg/片、胶囊或ml＝(Qx/Qd)×〔标示效价/RF〕$$式中Qx及Qd分别为样品和内标中的维生素E类似物的峰面积，RF按F(a)测得。$$如果标示量以国际单位〔IU〕计，用下列换算因子为重量：$$1mg全外消旋醋酸-α-生育酚＝1IU；1mg全外消旋-α-生育酚＝1.1IU；1mgRRR醋酸-α-生育酚＝1.36IU；1mgRRR-α-生育酚＝1.49IU；1mgRRR-α-生育酚-氢-琥珀酸酯＝1.21IU。
H.b 外标法
注入一定体积的按标鉴标示量制备的样品溶液以便得到可与[F(a)]标准溶液可比较的预期响应值。测量维生素E类似物〔S〕和内标的峰面积。$$维生素E类似物mg/片、胶囊或ml＝(Qx/Qd)×〔标示效价/RF〕$$式中Qx及Qd分别为样品和内标中的维生素E类似物的峰面积，RF按F(a)测得。$$如果标示量以国际单位〔IU〕计，用下列换算因子为重量：$$1mg全外消旋醋酸-α-生育酚＝1IU；1mg全外消旋-α-生育酚＝1.1IU；1mgRRR醋酸-α-生育酚＝1.36IU；1mgRRR-α-生育酚＝1.49IU；1mgRRR-α-生育酚-氢-琥珀酸酯＝1.21IU。
