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维生素制剂中的钴胺素〔维生素B12活性〕
维生素和其它营养物
- 滴定法
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B 氰钴胺素标准溶液
B.a 贮备液
100ng/ml，在密闭系统中精确称量美国药典氰钴胺素参比标准品相当于50－60μg氰钴胺素，该品已经干燥至恒重并在P2O5干燥皿中于暗处贮存。将其用25%乙醇溶解并稀释，使氰钴胺浓度恰好为100nm/ml，约10℃于暗处贮存。
B.b 中间溶液
1ng/ml将10ml贮备溶液(a)用25%乙醇至1L。约10℃于暗处贮存。
B.c 工作溶液
C 接种液
将莱希曼氏乳酸杆菌[24-26C(a)]贮备培养基转接种细胞至无菌的含有10ml液体培养基[24-26B(a)]试管中，在30至40℃间任选的温度下培养6－24h，温度偏差±0.5℃。在无菌条件下，将培养基离心并倾出上清液，用3份每份约10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮介质，[24-26B(c)]洗涤细胞，重新悬浮细胞于10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮介质中。用无菌0.9%NaCl溶液或无菌悬浮介质稀释一定量的样品，当悬浮介质调到100%T时，稀释的一定量的样品所得的T相当于干细胞重。每支试管为0.50－0.75ng。这们得到的细胞悬浮液为接种液。
D 测试溶液
使用前制备水提取液，每100ml中含1.3g无水Na2HPO4，1.2g柠檬酸·H2O，1.0g无水偏亚硫酸钠，Na2S2O5，将一定量的样品置于烧瓶中，每g或每ml样品用提取液应大于等于25ml，如果样品不易溶解，甚至可在液体中捣碎使其分散，然后剧烈地搅拌用H2O冲洗烧瓶的壁。$$在121－123℃高压釜加热灭菌10min，冷却。如发生结块，则搅拌混合物直到颗粒均匀分散，用H2O稀释混合物至测定的一定容积，让任何未溶的颗粒沉降，必要时可过滤或离心。取澄清液的一定量样品，加H2O，调节pH至6.0，再加H2O稀释至测定的一定体积，使每ml含有约相当于标准溶液[b(c)]的氰钴胺素活性。指定该溶液作为测定溶液，过量的亚硫酸可能影响测定的生物体，因而测定溶液含Na2S2O5含量必须小于等于0.03mg/ml。
E 测定
