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维生素制剂中的叶酸〔蝶酰谷氨酸〕
维生素和其它营养物
- 滴定法
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B 叶酸标准液
B.a 贮备溶液
100μg/ml，在密闭系统内准确称取已经干燥至恒重，并在暗处贮存于P2O5干燥器中的约相当于50－60mgUSP参比标准的叶酸，溶于约30ml 0.01N NaOH ，加约300ml水，用HCl溶液调pH值至7－8，再加水稀释使叶酸浓度准确至100μg/ml。在甲苯层下，约10℃暗处贮存。
B.b 中间溶液Ⅰ
1μg/ml。取10ml贮备溶液(a)，加入约500ml水，调pH值至7－8，再加水至1L。贮存于甲苯层下在暗处约10℃保存。
B.c 中间溶液Ⅱ
100μg/ml。取100ml中间溶液Ⅰ，加入约500ml水，调pH值至7－8，再加水至1L。贮存于甲苯层下，在暗处约10℃保存。
B.d 工作溶液
C 接种液
从粪链球菌[24-26C(b)]贮备培养基接种细胞移至盛有10ml培养基[24-26B(a)]的无菌管中，在30－40℃恒定在±0.5℃的任一选定温度培养6－24h，在无菌条件下，离心培养基并弃去上层清液，用每份约10ml灭菌的0.9%NaCl溶液或灭菌的悬浮培养基[24-26B(c)]洗涤细胞3次。重新将细胞混悬于10ml灭菌的0.9%NaCl溶液或灭菌的悬浮培养基中，这样得到的细胞混悬液为接种液。
D 测试溶液
将已知量的样品置于烧瓶中，并加入等于样品干重(g)10倍以上体积的水，所得溶液中叶酸含量应小于等于1.0mg/ml。加入相当于2ml NH4OH(2+3)/ 100ml液体，若样品不易溶解，则捣碎，使其均匀分散于液体中，然后剧烈振摇，并用0.1N NH4OH冲洗烧瓶壁。$$在121－123℃高压灭菌锅中加热灭菌混合物15min；冷却；如出现块状物，则搅拌混合物直至颗粒均匀分散。用水稀释混合物至一定体积，让未熔的颗粒沉降，必要时可过滤或离心，取一部分清液，加水调至pH值为6.8，再用水稀释至一定容积，使其第ml叶酸的含量相当于标准溶液[B(d)]。指定此液为测试液。
E 测定
