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维生素制剂中的烟酸和烟酰胺
维生素和其它营养物
- 滴定法
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B 烟酸标准溶液
B.a 贮备溶液
100μg/ml。在密闭系统中准确称量已干燥至恒重并在暗处贮于P2O5干燥器中的USP烟酸参比标准品50－60mg，溶于25%乙醇，并用25%乙醇稀释至烟酸浓度准确为100μg/ml，于暗处约10℃保存。
B.b 中间溶液Ⅰ
10μg/ml。用25%乙醇稀释100ml贮备溶液(a)至1L，于暗处约10℃保存。
B.c 工作溶液
C 接种液
C.a 液体培养基
用等容积的含0.2μg烟酸/ml的水溶液稀释一定体积的基础培养基贮备液[A]。分别取稀释的培养基10ml至各试管，加塞防止污染，在121－123℃高压釜中灭菌15min，尽快冷却试管，以避免因过热而着色，在暗处约10℃保存。
C.b 接种液
从植物发酵乳酸杆菌贮备培养基[24-26C(e)]转接种细胞至盛有10ml液体培养基(a)的无菌试管中，在30－40℃之间任选一温度恒定在±0.5℃内培养6－24h。在无菌条件下，离心培养基并倾去上层清液，用3份约10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮培养基[24-26B(c)]洗涤细胞，再将细胞悬浮于10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮培养基。这样得到的细胞悬浮液为接种液。
D 测定溶液
放一定量的样品于烧瓶中，并按下述方法操作，这样制得的最终溶液为测定液。
D.a
含碱性物质很少的干样或半干样加一定量的1N H2SO4于样品中，其体积(ml)大于等于10倍干样品重(g)，所得溶液烟酸含量小于等于5.0mg/ml。如果样品不易溶解，使其均匀分散于溶液中；然后猛烈振摇，用1N H2SO4冲洗烧瓶壁。$$于121－123℃高压釜中灭菌30min，冷却，如发生结块，搅拌混合物直至颗粒均匀分散。如无可溶性蛋白质存在，用NaOH溶液调混合物至pH6.8，用水稀释至最终体积，使其每ml含有的烟酸约相当于标准溶液[B(c)]的含量。如果溶液不澄清，则过滤。$$如有可溶性蛋白质存在，边猛烈振摇边用NaOH溶液调混合物至pH6.0－6.5；然后立即加入稀盐酸直至不再产生沉淀为止。〔多数蛋白质的等电点，pH值通常约为4.5〕。用水稀释混合物至一定体积并过滤。[如果混合物过滤困难，则离心和或用烧结多孔玻璃过滤，常用适当的分析用助滤剂代替〔也可先经过助滤剂〕滤纸过滤。无灰过滤纸浆及Celite分析助滤剂是满意的]。取一部分澄清滤液，先滴加稀HCl，检查可溶性蛋白，如无沉淀生成，然后边猛烈振摇边加入NaOH溶液，将此份溶液按下列操作进行：
D.a.1
如不再产生沉淀，在猛烈振摇下加入NaOH溶液至pH6.8，用水稀释，使其每ml烟酸含量相当于标准溶液[B(c)]的含量。如出现浑浊，则重新过滤。
D.a.2
如不再产生沉淀，在猛烈振摇下加入NaOH溶液至pH6.8，用水稀释，使其每ml烟酸含量相当于标准溶液[B(c)]的含量。如出现浑浊，则重新过滤。
D.b 含碱性物质较多的干样或半干样
含碱性物质很少的干样或半干样加一定量的1N H2SO4于样品中，其体积(ml)大于等于10倍干样品重(g)，所得溶液烟酸含量小于等于5.0mg/ml。如果样品不易溶解，使其均匀分散于溶液中；然后猛烈振摇，用1N H2SO4冲洗烧瓶壁。$$于121－123℃高压釜中灭菌30min，冷却，如发生结块，搅拌混合物直至颗粒均匀分散。如无可溶性蛋白质存在，用NaOH溶液调混合物至pH6.8，用水稀释至最终体积，使其每ml含有的烟酸约相当于标准溶液[B(c)]的含量。如果溶液不澄清，则过滤。$$如有可溶性蛋白质存在，边猛烈振摇边用NaOH溶液调混合物至pH6.0－6.5；然后立即加入稀盐酸直至不再产生沉淀为止。〔多数蛋白质的等电点，pH值通常约为4.5〕。用水稀释混合物至一定体积并过滤。[如果混合物过滤困难，则离心和或用烧结多孔玻璃过滤，常用适当的分析用助滤剂代替〔也可先经过助滤剂〕滤纸过滤。无灰过滤纸浆及Celite分析助滤剂是满意的]。取一部分澄清滤液，先滴加稀HCl，检查可溶性蛋白，如无沉淀生成，然后边猛烈振摇边加入NaOH溶液，将此份溶液按下列操作进行：
D.c 液体样品
用稀H2SO4调混合物至pH5.0－6.0，加水体积(ml)大于等于10倍于干样品重(g)。所得溶液的烟酸含量必须小于等于5mg/ml。然后按每100ml液体加入10ml 10N H2SO4的量计算应加的硫酸量。并按(a)进行操作。
E 测定
