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维生素制剂中的核黄素〔维生素B2〕
维生素和其它营养物
- 滴定法
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B 核黄素标准液
B.a 贮备液
100μg/ml。于密闭系统中准确称取已干燥至恒重并贮于暗处P2O5干燥器中的USP核黄素参比标准品50-60mg。悬浮于约300ml 0.02N HOAc中,并在蒸汽浴上温热,搅拌至固体溶解,冷却,并用0.02N HOAc稀释,使核黄素浓度恰为100μg/ml,于约10℃暗处贮存于甲苯下。
B.b 中间溶液Ⅰ
10μg/ml。将100ml贮备液(a)用0.02N HOAc稀释至1L,于约10℃暗处甲苯下保存。
B.c 工作溶液
C 接种液
C.a 液体培养基
将一定量的基础培养基贮备液[24-29A]用等体积的含有0.1μg核黄素/ml水溶液稀释。将每份10ml的稀释培养基置于各试管中,加塞以防污染。于121-123℃高压釜灭菌15min,尽快冷却,以防因过热而产生颜色,于约10℃暗处贮存。
C.b
从干酪乳杆菌贮备培养基,转接种细胞至有10ml液体培养基(a)的无菌试管中,在30-40℃间的任一选定温度〔恒定在±0.5℃〕,在无菌条件下培养6-24h,离心培养基并倾去上层清液,用每份约10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮培养基[24-26B(c)]洗涤细胞3次,重新悬浮细胞于10ml无菌的0.9%NaCl溶液或无菌悬浮培养基中,这样得到的细胞悬浮液为接种液。
D 测试液
〔整个过程中,保持溶液pH<7.0,以防止核黄素的损失〕$$取一定量的样品于烧瓶中,按下述进行操作。〔对于用滤纸过滤的操作,采用已知不吸附核黄素的滤纸,已知无灰滤纸。〕指定这样得到的最终溶液为测试液。
D.a 含不可检出量碱性物质的干样或半干样
D.b 含可检出量碱性物质的干样或半干样
加入0.1N HCl,其体积(ml)相当于大于等于10倍干燥样品重(g),所得溶液核黄素含量必须小于等于0.1μg/ml,如样品不易溶解,则粉碎使其均匀分散于液体中,然后剧烈振摇,并用0.1N HCl冲洗瓶壁。$$然后按24-29D(a)进行操作,但这里参比液的烟酸浓度约相当于标准溶液[24-29B(c)],需改用核黄素浓度约相当于标准溶液[24-29B(c)]。$$如果样品中的核黄素含量太低以致不能符合要求,将在约pH4.5得到的澄清滤液在减压下加热浓缩至适当体积,必要时过滤,然后按24-29D(a)(1)进行操作。
D.c 液体样品
用稀HCl调节混合物pH至5.0-6.0,加水,其体积(ml)相当于大于等于10倍干样品重(g);所得溶液核黄素含量必须小于等于0.1mg/ml。然后加入适量HCl〔按100ml液体中含1.0ml 10N HCl〕。按(a)进行操作。
E 测定