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维生素制剂中的氨基酸
维生素和其它营养物
- 微生物法
- 〔仅适用于含有游离氨基酸而不含可检出量蛋白质的样品〕
A 基础培养基贮备液
〔全部溶液于甲苯下保存，而维生素与氨基酸溶液贮存于约10℃暗处。〕
A.a 氨基酸溶液
按表24-4制备各种氨基酸的贮备液，用可买到的最纯的氨基酸〔最好用DL型氨基酸，因它不易为其它氨基酸沾污〕。如用DL型氨基酸，则应将表中所给的量加倍，用水溶解氨基酸〔必要时可加热〕并稀释至规定的体积。当指定用特殊溶剂时，则先用其溶解氨基酸至一定量，再用水稀释至最终体积。
A.b 腺嘌呤-鸟嘌呤-尿嘧啶溶液。
A.c 盐溶液A
溶解50g无水K2HPO4及50g无水KH2PO4于水中，并稀释至500ml，加5滴HCl。
A.d 盐溶液B
溶解20g MgSO4·7H2O，1g NaCl，1g FeSO4·7H2O及1g MnSO4·H2O于水中，并稀释至500ml加5滴HCl。
A.e 维生素溶液Ⅰ
溶解25mg核黄素，25mg盐酸硫胺，50mg烟酸及0.15mg生物素于0.02N HOAc并使成1L。
A.f 维生素溶液Ⅱ
溶解50mg吡哆醛，50mg盐酸吡哆胺，25mg泛酸钙，5mg对氨基苯甲酸及0.25mg叶酸于25%乙醇使成1L。
B 基础培养基
表24-4B列出了所有测定培养基，在制备测定培养基时，从培养基中清除所要测定的特定氨基酸。基础培养基中向组分的浓度等于在测定管中加入样品或标准溶液及水以后的两倍。表中列出了为50，100，150及200测定管所需组分的量。每次测定新鲜制备。$$边混合边加葡萄糖及NaOAc至混合液中，当溶解完全后，调pH至6.8，并稀释定容〔注：葡萄糖及NaOAc的用量取决于测定中所用的生物〕。
C 培养液和悬浮培养基
C.a 琼脂培养基。
C.b 液体培养基
用等体积水稀释一定量的全部氨基酸基础培养基，以10ml为1份置于各试管中，加塞以防污染〔或采用螺旋盖的试管〕，在121－123℃高压釜灭菌15min，尽快冷却试管以减少带色物的生成，于约10℃暗处贮存。
C.c 液体悬浮培养基
用等体积的水稀释一定体积的基础培养基〔不含待分析的氨基酸〕，以10ml为1份加至各试管，加塞以防污染。于121－123℃高压釜灭菌15min，尽快冷却，以减少带色物的生成，贮存于约10℃暗处。
D 试验微生物的贮备培养液
D.a 粪链球菌
ATCC，No.9790。用于测定异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和组氨酸。
D.b 植物乳杆菌
ATCC，No.8014。用于测定异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸。
D.c 啤酒小球菌
ATCC No.8042。用于测定赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸和组氨酸。
E 接种液
从适当微生物的新鲜贮备培养基中取细胞接种至盛有10ml液体培养基的无菌试管中。于34±0.5℃培养16－24h，在无菌条件下，离心并倾出上层清液，将细胞悬浮于10ml适量的无菌悬浮培养基中。
F 氨基酸参比标准液
将标准化的氨基酸在P2O5上干燥至恒重贮存于P2O5干燥器中，在密闭系统内按表24-4C规定的量，准确称取每种氨基酸制备贮备液，并用水稀释至最终容积。用水稀释一定量的标准贮备液到规定的体积以制备标准工作溶液。标准贮备液贮存于甲苯下约10℃暗处。每次测定应制备新鲜标准工作溶液。〔切勿振摇贮于甲苯下的标准溶液〕。
G 光度计的校准
H 样品制备
H.a 含游离氨基酸的液体
用水稀释至要求的浓度以得到测定液。
H.b 干样或半干样
加水，其体积(ml)相当于大于等于10倍样品干重(g)，在121－123℃高压加热10min，冷却，稀释定容，必要时过滤，以得到测定溶液。
I 测定
J 测定
K 计算
