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家禽饲料添加剂中的维生素D3
维生素和其它营养物
- 小鸡生物测定法
- 〔适用于鱼和鱼肝油及其他提取物，也适用于那些作为补充维生素D含量的饲料样品。不适用于辐照过的麦角固醇产品或辐照过的酵母，除非推荐它们作为家禽饲料。本测定法是在特定条件下，借助本法测定产品的效价与USP胆钙化醇参比标准的效价相比较，以控制生长鸡骨灰的含量。〕
A 佝偻病基础饲料
佝偻病基础饲料是一种均匀的混合物。按下述规定的比例配制，将各成份磨成细粉。$$$T成份/百分率$$磨碎黄玉米/58$$麦粉麸或麦细麸/25$$国产天然酸沉淀铬蛋白/12$$三元磷酸钙/2$$碘化盐(0.02%KI)/1$$未经辐照的酵母〔含N至少7%〕/2$T每公斤上述混合物加入0.22g MnSO4·5H2O。
B 测定
将小鸡装入具有筛网底座的笼内，远离日光或其它的光化效应的光源，因它们会影响小鸡的钙化。鸡房应能防止室温发生大的变化〔以恒温为佳〕。除非能控制房温，否则每一鸡笼均应使用一套相应的电热设备。在同一试验中，全部实验用小鸡均于同日开始试验。并应保证所有的试验组的环境条件的一致性。$$所有各组均用1－2天龄的白来享小鸡进行实验，具体说明如下：设1个或1个以上不饲喂含维生素D饲料的阴性对照组和3个或3个以上饲喂含不同水平维生素D〔USP维生素D参比标准〕饲料的阳性对照组。对每种测试样品设1个或一个以上试验组，每一个阳性对照组和试验组的小鸡大于等于20只；每一个阴性对照组的小鸡大于等于10只。$$应使用同批基础饲料制备实验中的各组饲料。加到基础饲料中的参比标准〔维生素D〕，其量应达到能使〔阳性对照组〕测出的小鸡骨灰含量的增加率(%)超过阴性对照组〔如获得最大值的骨灰含量，往往就无法进行比较〕。加测试产物到基础饲料中，其量应达到使得有可能直接比较阴性试验组和阳性对照组的响应值。$$加到阴性对照组基础饲料中玉米油的量等于试验组任一组喂饲油的最大值。把玉米油加到其它组的饲料中，使玉米油和含维生素D油的总量等于加到阴性对照组饲料中的玉米油量。$$对各组随意按规定饲料和水〔天然水或蒸馏水〕实验期共21天。剔去与缺乏维生素D无关的异常鸡或病鸡。每一参比组或实验组至少应有15只小鸡用于计算试验样品中维生素D的效价。$$对于任何一种实验，都应始终如一地使用以下(a)或(b)中具体说明的方法，对骨骼进行提取、干燥和灰化。
B.a
处死小鸡，摘取每只小鸡的左胫骨，剔除粘附组织〔为了便于剥离粘附组织，可将骨骼放入沸水中煮小于等于2min之后，将骨骼保存于乙醇中，供提取用〕。用适当由脂溶剂或其它溶剂，用热乙醇提取20h，接着用乙醚提取20h。为便于提取将骨骼压碎，在95－100℃(气压<100mmHg相当于13.3kPa)下，将已提取的骨骼烘干至恒重〔约5h〕，置干燥器中冷却后称重。取出〔热〕炉内的每组脱水脱脂的小鸡胫骨，在规定450－550℃灰化至恒重，或最好在约850℃下，将其灰化1h〔最好进行每一根胫骨的骨灰含量测定〕。
B.b
另一种方法是用趾骨骨灰测定维生素D的响应值：通过切开的第2和第3跗骨远侧端间的关节，而节下每只脚的中趾骨。并以整个趾骨作为测定样品。清除非组织的一切污物，不用溶剂提取。将各组样品混合，于100℃烘箱中干燥8h，再在600℃高温炉中灰化4h。
C 结果的判断
在本测定方法中，在生物活性上，小鸡1IU维生素D等于USP维生素D的参比标准中的，1IU维生素D。如果饲喂一定IU维生素D的各试验组小鸡的脱水脱脂骨骼的含灰量(%)等于或大于相同IU的USP参比标准的维生素D的骨灰含量的话，那么测试产物就符合其申报的小鸡IU的维生素D的效价。
