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乳基婴儿方便食品配方中烟酸和烟酰胺
维生素和其它营养物
- 微生物-比浊法
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A 基础培养基贮备液
按24-26A制备使用的溶液与下列顺序的混合物合并：25ml胱氨酸-色氨酸，(e)；5ml腺嘌呤-鸟嘌呤-尿嘧啶溶液，(b)；5ml维生素溶液Ⅳ，(o)；5ml维生素溶液Ⅴ，(p)；5ml盐溶液A，(i)；和5ml盐溶液B，(j)；加入约100ml水，边混合边加2.5g无维生素的水解酪蛋白，(a)；10g无水葡萄糖和5g无水醋酸钠。当溶解完毕，则用NaOH溶液调节pH至6.8，再用水稀释至250ml。
B 烟酸标准溶液
B.a 贮备液
100μg/ml。在密闭系统中，精确称取50－60mgUSP烟酸参比标准。〔该标准物已干燥至恒重并于P2O5干燥器中暗处贮存〕。用25%乙醇溶解，并用25%乙醇稀释使烟酸浓度恰好为100μg/ml。于10℃在暗处贮存。
B.b 中间溶液
1μg/ml。将5ml贮备液用25%乙醇稀释至500ml。
B.c 工作溶液
0.014μg/ml。将7ml中间溶液(b)用水稀释至500ml，还制备第二级工作溶液，一个比初级的工作溶液的烟酸浓度高一些，另一个比初级的工作溶液的烟酸浓度低一些〔通常为0.01和0.02μg/ml)，这样做免得样品中烟酸浓度对使用初级工作溶液而言显得太高或太低。
C 接种
C.a 液体培养基
将一定量的基础培养基贮备液〔A〕用等体积的含有烟酸0.2μg/ml的水溶液稀释。将每份10ml的稀释液培养基加至各试管中，盖上盖子以防止污染，在高压釜中于121－123℃消毒15min，迅速冷却试管以免过热而引起色泽变深，于10℃在暗处贮存。
C.b 接种液
将乳酸杆菌的贮备培养液中的细胞转种至灭菌的盛有10ml液体培养基的试管中，在恒温浴中于37℃培养6－24h。在无菌条件下离心培养液并倾去上清液，用每次约10ml无菌的0.9%NaCl溶液洗涤细胞，共3次。用10ml无菌的0.9%NaCl溶液再将细胞悬浮以得到接种液。
D 测定液
将一定量含有10－30μg烟酸的混合样置于烧瓶中，加入1N H2SO4，其体积等于或大于样品干重g的10倍，然后剧烈地搅拌，用1N H2SO4冲洗烧瓶壁。$$用高压釜于121－123℃消毒混合物30min，然后冷却，如果发生结块，搅拌混合物，直至颗粒完全分散。$$如果存在可溶性蛋白质，则用NaOH溶液于剧烈搅拌下调节混合物的pH至6.0－6.5，立即加稀HCl直至再无沉淀生成〔许多蛋白质的等电点，通常在pH约4.5〕，用水稀释混合物至一定的体积，且过滤〔在混合物难过滤情况下，可以离心或通过烧结多孔玻璃过滤器过滤、采用合适的分析助滤剂作替代品或预先通过纸过滤，无在过滤纸浆和硅藻土分析助滤剂是满意的〕。取澄清的滤液，滴加稀HCl检查可溶性蛋白质，如果无沉淀生成，则剧烈搅拌，用NaOH溶液滴加此整分样品，按下述方法进行检查：
D.1
如再无沉淀发生，则边剧烈搅拌边用NaOH溶液调节pH至6.8，用水稀释至最终测量体积，使其每ml的烟酸含量约相当于B(c)标准溶液的含量。如发生絮状物，则再过滤。
D.2
如再无沉淀发生，则边剧烈搅拌边用NaOH溶液调节pH至6.8，用水稀释至最终测量体积，使其每ml的烟酸含量约相当于B(c)标准溶液的含量。如发生絮状物，则再过滤。
E 测定
将一定量含有10－30μg烟酸的混合样置于烧瓶中，加入1N H2SO4，其体积等于或大于样品干重g的10倍，然后剧烈地搅拌，用1N H2SO4冲洗烧瓶壁。$$用高压釜于121－123℃消毒混合物30min，然后冷却，如果发生结块，搅拌混合物，直至颗粒完全分散。$$如果存在可溶性蛋白质，则用NaOH溶液于剧烈搅拌下调节混合物的pH至6.0－6.5，立即加稀HCl直至再无沉淀生成〔许多蛋白质的等电点，通常在pH约4.5〕，用水稀释混合物至一定的体积，且过滤〔在混合物难过滤情况下，可以离心或通过烧结多孔玻璃过滤器过滤、采用合适的分析助滤剂作替代品或预先通过纸过滤，无在过滤纸浆和硅藻土分析助滤剂是满意的〕。取澄清的滤液，滴加稀HCl检查可溶性蛋白质，如果无沉淀生成，则剧烈搅拌，用NaOH溶液滴加此整分样品，按下述方法进行检查：
