中国化工网首页 >> 化工助手 >> 化学物质分析方法数据库
乳脂中的〔植物〕脂肪
油和脂肪
- 气相色谱法
-
A 样品的制备
B 试剂
B.a GC柱填料
B.a.1 固定相
OV-22甲基苯基聚硅氧烷。
B.a.2 载体
100－120目涂有1或3%固定相的该填料。
B.b 乙酸乙酯
经玻璃容器蒸馏的。
B.c 胆甾烷标准溶液
0.4μg/μl。称取40mg胆甾醇标准品于100ml容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻线。
B.d 胆甾烷内标溶液
0.2μg/μl。用乙酸乙酯将10ml标准溶液(c)，稀释到20ml。
B.e β-谷甾醇乙酸酯标准溶液
2μg/μl。称取22.2mgβ-谷甾醇乙酸酯标准品〔纯度约90%〕于10ml容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻线。市售β-谷甾醇乙酸酯为菜油甾醇乙酸酯〔早期洗脱出来的少量组份〕和β-谷甾醇乙酸酯的混合物。标准品中β-谷甾醇乙酸酯的浓度可通过2－3μl标准溶液用色谱加以测定。通过从峰的两边画切线与基线相交而测定菜油甾醇乙酸酯和β-谷甾醇乙酸酯的峰面积，以所得三角形的高乘以底的1/2求其面积。$$β-谷甾醇乙酸酯的浓度＝(Cs×Ps)/(Ps+Pc)$$式中Cs为每ml甾醇乙酸酯的毫克数，Ps为β-谷甾醇乙酸酯的峰面积，Pc为菜油甾醇乙酸酯的峰面积。
B.f 胆甾烷-β-谷甾醇乙酸酯标准混合物
0.2μg胆甾烷和1.0μgβ-谷甾醇乙酸酯/μl。将等体积的(c)和(e)混合。
C 仪器
C.a 气相色谱
配有H火焰离子化检测器和1mV长条纸记录仪。温度〔℃〕：柱温，220－260；进样室器和检测温度，240－270；流速：N2〔超高纯级〕，压力138－172kPa，使β-谷甾醇乙酸酯在16－20min被洗脱出来；H2，约40－45ml/min；空气300－340ml/min。$$调节静电计的灵敏度使2.5μgβ-谷甾醇乙酸酯产生约50%的偏摆〔10^-9^－10^-10^A满量程偏摆在记录仪上为1mV响应〕。重复进样直到相同体积标准溶液连续进样所产生的信号相等为止。
C.b 柱的制备
用100－200目含有1－3%固定相的Gas-Chrom Q装1.8m×4mm内径的玻璃柱。或将0.4－1.2g聚硅氧烷溶解于200ml甲苯或CH2Cl2-甲苯(1+1)中，加热溶解〔聚硅氧烷在混合溶剂中溶解很慢〕。〔注意：硅氧烷有毒。操作时请使用一次性手套和使用有效的排雾设备〕。向40g Gas-Chrom Q中加入上述溶液，放置10min，间隔缓慢回荡之。在50℃水浴或蒸气浴上间隔缓慢搅拌的情况下，用旋转蒸发仪蒸干，于50℃真空干燥箱中除去残余的溶剂。$$装柱时先用5%的二氯二甲基硅烷的甲苯溶液小心地洗涤柱子的内壁和少许玻璃棉，用甲醇淋洗直到淋洗液用pH指示剂测试时为中性，空气中凉干。用小块硅烷化的玻璃棉和具孔隔垫塞住柱子的出口，隔垫塞住柱子进口的一半。从进样口加入涂有固定相的填料，加填料时使用漏斗和塑料管，并很缓和的敲打柱。加入1/4填料时，取掉漏斗，在进样口通上约34.5－69kPa，氮气，使填料缓和地下沉。装到进样口一端2.5cm以下后，用硅烷化玻璃棉塞住。
C.c 老化色谱柱
柱子通压力约34.5－69kPa氮气，260℃加热大于等于8h。停止通氮气，升温至290℃继续加热大于等于8h。降温到260℃，N气调到5－10psi，再加热8－12h。
C.d 性能
注射约2μlβ-谷甾醇乙酸酯标准溶液进行色谱分离，以测定其保留时间和柱子的分离度。β-谷甾醇乙酸酯峰的最小理论塔板数为1600。$$理论塔板数＝(L/B)^2^×16$$式中L为从进样点到β-谷甾醇乙酸酯峰的距离，mm，B为β-谷甾醇乙酸酯峰的三角形基底的宽度，mm。
D 测定
用移液管移取1.0ml胆甾烷内标溶液到3个装有甾醇乙酸酯的小瓶中，旋转小瓶以洗其边，回荡溶解。注入2－3μL样品溶液和2－3μL标准混合物，(f)，最少平行做两次。从标准混合物的保留时间中确定样品的β-谷甾醇乙酸酯峰。如果样品峰高大于满量程的60%，向样品溶液中再加入1.0ml的内标溶液，重新对样品和标准混合液进行色谱分离。以mm为单位测量胆甾烷和β-谷甾醇乙酸酯的峰高。$$mgβ-谷甾醇乙酸酯/100g样品＝$$(Hi/Hx)×(Cx/Ci)×(Sx/Si)×(Qi/Q)×100$$式中Hi和Hx分别为标准混合物中胆甾烷和β-谷甾醇乙酸酯的峰高(mm)；Sx和Si分别为样品中β-谷甾醇乙酸酯和胆甾烷的峰高(mm)；Cx和Ci分别为标准混合物中μgβ-谷甾醇乙酸酯和胆甾烷/μl；Qi为μg胆甾烷/μl样品；Q为mg样品/μl。
