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植物脂肪和油中的动物脂肪
油和脂肪
- 薄层色谱法分离甾醇
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B 仪器和试剂
B.a TLC板
在固定板上放置5个大小相匹配的20×20cm玻璃板，使其在一条直线上，在铺板前用带有乙醇的棉纸擦洗板以除去灰尘和手印。调节涂板铺层厚度为0.5mm。称取45g硅胶于500ml锥形瓶中，加入130ml水，剧烈振荡25－30s后倒入涂板器中。立刻用硅胶悬浊液铺板，将板置于不受振动的地方直到成胶(0.5－1h)。在110℃干燥板2h以上，储存在干燥箱中待用。
B.b 氯仿
在玻璃器皿中蒸馏过的氯仿。
B.c 乙醚
无水，醇含量小于等于0.01%。
B.d 石油醚
用玻璃器皿进行蒸馏，沸点30－60℃。
B.e β-谷甾醇标准溶液
3μg/μl。称取30.0mgβ-谷甾醇标准于10ml容量瓶中，用乙酸乙酯稀释到刻线。
B.f 薄层色谱仪
玻璃板，20×20cm；涂板器；固定板；点样模板；微量注射器，10μL；干燥储存箱；储存架；展开缸；长波15W UV灯〔使用时请戴UV吸收眼镜〕。
B.g 薄层板刮板。
C 板的制备
在固定板上放置5个大小相匹配的20×20cm玻璃板，使其在一条直线上，在铺板前用带有乙醇的棉纸擦洗板以除去灰尘和手印。调节涂板铺层厚度为0.5mm。称取45g硅胶于500ml锥形瓶中，加入130ml水，剧烈振荡25－30s后倒入涂板器中。立刻用硅胶悬浊液铺板，将板置于不受振动的地方直到成胶(0.5－1h)。在110℃干燥板2h以上，储存在干燥箱中待用。
D 薄层色谱
给展开槽衬上吸墨纸，加入100ml乙醚-石油醚(1+1)。盖上盖子，平衡2h。在板上从距离底边17cm和距离其余各边1cm处画线。在距离底边2cm和距离板的一边3cm处点10μl-β-谷甾醇溶液，(e)，将不被皂化物质，A溶于200μl CHCl3中，将所有溶液分20份〔每份10μl〕点于距离底边2cm处，使成一条虚线，使点与点中心间的距离为0.75cm。用100μl CHCl3冲洗小瓶，并将其分为相同的等分点于样品点上。$$立刻将板浸入平衡好的展开槽中〔调节板的位置，使铺层表面暴露于槽中的体积为最大〕；盖上盖子，并用胶带封上。当溶剂前沿到达17cm停止线处时，从展开槽中将板取出。蒸发溶剂，在暗室中于长波UV灯下看板。用针画出甾醇带〔与β-谷甾醇标准具有相同的Rf值，0.2－0.3〕，按下述方法取下甾醇带〔不要取下β-谷甾醇标准〕：用方头不锈钢铲将甾醇带刮到100ml烧杯中，用20ml CHCl3将其转移到顶端直径为70mm，装有直径为12.5cm的折叠滤纸的漏斗中。用CHCl3萃取甾醇5次，每次用CHCl3 10ml，在N2气氛中于蒸气浴上蒸发合并的萃取液近干。用CHCl3将残余物转入3英钱的小玻璃瓶中〔带有AL衬垫的螺丝帽〕。N2气氛中蒸干。〔或者用TLC刮刀将甾醇带刮下，用70ml CHCl3将甾醇从硅胶中洗脱下来〔洗14次，每次5ml〕，N2气氛下于蒸气浴上蒸发溶剂，至近干。
