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植物脂肪和油中的动物脂肪
油和脂肪
- 甾醇的气相色谱
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E 试剂
E.a 胆甾醇标准溶液
1.2μg/μl。称取60.0mg胆甾醇标准品于50ml容量瓶中,用乙酸乙酯稀释至刻线。
E.b 胆甾烷-胆甾醇标准混合物
0.2μg胆甾烷和0.6μg胆甾醇/μl。将相同体积的胆甾烷标准溶液B(c),与胆甾醇标准溶液混合。
E.c 胆甾醇-β-谷甾醇标准混合物
0.6μg胆甾醇和1.5μgβ-谷甾醇/μl。将相同体积的胆甾醇标准溶液和β-谷甾醇标准B,(e)相混合。
E.d 胆甾醇乙酸酯标准溶液
0.6μg/μl。称取30.0mg胆甾醇乙酸酯标准品于50ml容量瓶中,用乙酸乙酯稀释至刻线。
F 仪器
F.a 气相色谱
配有H火焰离子化检测器和1mV长条纸记录仪。温度〔℃〕:柱温220-250;检测器和进样器温度,240-270;流速:N2〔超高纯级〕,20-25 138-172kPa,使胆甾醇在8-12min被洗脱;H2,约40-45ml/min;空气:300-340ml/min;静电计灵敏度1×10^-9^A满量程对应于记录仪1mV响应。$$调节静电计的灵敏度使1.5μg胆甾醇产生约50%响应。重复进样直至相同体积的标准混合物的连续进样所产生的峰高相同为止。
F.b 柱的制备
F.c 柱的老化
F.d 性能
注射约2μl胆甾醇-β-谷甾醇标准混合物进行色谱分离,以测定保留时间和柱子的分离度。胆甾醇峰所需最小理论塔板数为1600;理论塔板数=(L/B)^2^×16,式中L为从进样点到胆甾醇峰的距离(cm),B为胆甾醇峰三角形的基宽(cm)。此外,以峰分离度表示胆甾醇和菜油甾醇的峰分离情况时,其值应大于等于2.2。峰分离度=2D/(B+P),式中D为胆甾醇和菜油甾醇的峰最大值之间的距离(cm);B为胆甾醇峰三角形的基宽;P为菜油甾醇峰三角形的基宽。测定约含相同量〔约相同的峰面积〕的胆甾醇和菜油甾醇样品的峰分离度;注射样品所产生的峰高约为记录纸宽的20-25%。
G 测定
移取1.0ml胆甾烷内标溶液于3dram含有萃取甾醇的小玻璃瓶中,通过旋转小瓶用内标溶液洗涤瓶壁,回荡之以使甾醇溶解。注射2μl样品,最少重复两次。用2μl胆甾烷-胆甾醇标准混合物重复进样。通过与标准混合物中峰的保留时间相比较以确定样品中胆甾醇的峰。如果样品中胆甾醇的峰高>60%满量程响应,再向样品中加入1.0ml胆甾烷内标溶液,按上述方法对样品及标准混合物进行色谱分离。测定胆甾醇和胆甾烷的峰高(mm)。按下式计算经内标校正的胆甾醇mg/100g样品:$$mg胆甾醇/100g=(Hi/Hx)×(Cx/Ci)×(Sx/Si)×(Qi/Q)×100$$式中Hi和Hx分别为标准混合物中胆甾烷和胆甾醇的峰高(mm);Sx和Si分别为样品中胆甾醇和胆甾烷的峰高(mm);Cx和Ci分别为标准混合物中μg胆甾醇和胆甾烷/μL;Qi为样品中μg胆甾烷/μl,Q为mg样品/μl。
H 确定试验
胆甾醇的存在可通过甾醇乙酸酯的气相色谱〔GC〕加以证实。GC测定胆甾醇后,在N气下于蒸气浴上蒸发样品至干。冷却后加入3ml吡啶和1ml乙酸酯。盖上玻璃小瓶,蒸气浴上回荡直到甾醇溶解,蒸气浴上继续加热1h。用N气流蒸发,直到检测不到吡啶气味。对甾醇乙酸酯及胆甾醇乙酸酯标准溶液进行色谱分离,对比样品及胆甾醇乙酸酯峰的保留时间。