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可可产品中的可可碱和咖啡因
可可豆及其制品
- 液相色谱法
- 〔适用于含各种水平加糖配料的产品，可可碱相对的不溶于水〔约0.5g/L，室温〕。因此，样品应当含有0.5g以下干燥无油脂可可固体/100ml水〕。
A 仪器
A.a 溶剂传递系统
M6000A型。
A.b 吸光度检测仪
M440型，调至280nm，满量程偏转为0.2A单位。
A.c 样品进样系统
U6K。
A.d 记录仪
纸速为0.5cm/min,10mV。
A.e 色谱柱
C18微米键合填充剂，10um颗粒大小，柱直径4mm，长30cm。
B 试剂
B.a 生物碱标准溶液
在标准大气压下，再纯化试剂级生物碱，并存放在硅胶中。准确称取适量，稀释到浓度为50uL/ml，通过0.45um的膜过滤，存放在聚乙烯瓶中，每三周制备一次新的标准溶液。
B.b 液相色谱法用水
将去离子蒸馏水通过Iuionis水处理吸附柱以去除痕量的有机物质。
B.c 流动相
MeOH〔色谱纯〕-HOAc-H2O〔20＋1＋79〕,以20001b/in^2^的公制压力使之流速为1ml/min。
B.d 沸片
SiC或其它无吸附能力的物质。
C 测定
在带有衬聚四氟乙烯螺纹帽的已称重试管中准确称取近0.6g可可、4.5g奶油巧克力或1.0g巧克力液体，称准至0.1mg。用30ml石油醚振荡以提取油脂，共提取两次。在2000r/min转速离心10min，小心倾滗溶剂。把管子放在热水浴上以除去溶剂、称量干管和残留物，计算残留物重量。用水定量转移成分于已称量过的250ml含少量沸片的锥形烧瓶中。＄＄ 加水约95ml。在100℃下加热25min，冷却到20℃，再加水，使最后重量＝带片的瓶子＋脱脂残留物重量＋100.0g。塞住烧瓶，振荡至完全混合。转移混合物于离心管中，以2000r/min离心5min，通过0.45um滤膜过滤上层清液部分，进样褐色滤液于色谱仪中。＄＄ 在安排样品溶液的分析过程中，至少要往色谱仪中进样经过滤的标准溶液两次。如果连续分析5个以上的样品，有规则地间歇地进样标准溶液。通过面积单位的比例，使用峰高或数字积分仪来计算各种生物碱的浓度。
