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动物饲料中的蛋白质〔粗〕
动物饲料
- 杜马斯法
-
A 原理
用热解配合燃烧的方法游离出来的N，以CO2载气带入量氮仪中，CO2被KOH吸收，测出剩余氮气的体积，再乘以换算因子以换算成与其相当的蛋白质。
B 仪器和试剂
B.a 氮分析仪和附件
由燃烧、收集和测量系统组成。使用Model 29A型仪器及以下的附件和试剂。铝燃烧舟，No. 29－412；硼硅酸耐热玻璃燃烧管，No. 29－328；CuO－Pt催化剂〔用2.5%铂重整催化剂的CuO丝〕，No. 29－160；还原铜丝，No.29－120；Co3O4，No.29－170；CuO细粉，No. 29－140；45%KOH，No.29－110。
B.b 天平
准确至0.01mg。
B.c 气压计
Hg型，可读至0.1mm。
C 样品的制备
磨碎并过30号筛，储于带盖的瓶中。
D 测定
在燃烧炉达到热平衡后，将燃烧循环控制钮转到开始〔START〕位置。使燃烧按循环过程正常进行。观察燃烧循环在结束时上、下燃烧炉的高温计指示的温度，炉温应该是850－900℃，如果不是，应该加以调节。$$将不锈钢片插进燃烧管的下端〔远离商标的那一头〕，准备好燃烧管。在管的上端放入足量的玻璃毛，当塞紧时形成6mm的塞垫。用11mm的玻璃棒将玻璃毛推到不锈钢塞处。将管子垂直地拿着，使CuO-Pt催化剂从分配瓶中直接倒入燃烧管，直到装至商标的上端。敲打或在凳子上振动燃烧管直到催化剂填实到商标中心位置。$$称量并记下空铝燃烧盘的重量，把样品放入盘中。称取和记下样品和燃烧盘的重量，两者之差即是样品重。为了得到合适的样品量，应使用下列的样品重(mg)：$$狗牙草150－300；稻糠、麦麸、脱水紫花苜蓿150－250；系列饲料100－200；棉籽饼75－150；食用大豆蛋白50－150。样品称准至0.01mg。为了避免重量发生变化，在样品和盘放在天平上的1min之内记录重量。如果做不到，则用称量瓶。$$将燃烧管转至水平位置。从样品管开口端小心地推入样品盘。使样品盘滑到或推到商标处，但不使样品洒出来。抬起样品管开口的一头使样品管与水平方向成60度－70度角。一边用拇指和食指转动燃烧管一边在凳子上敲打和振动燃烧管。抬起开口的一头装入和样品等体积的Co3O4和CuO细粉。加入上述试剂的一个方便的方法是，在另一个燃烧盘中加入与样品等体积的CuO细粉和Co3O4，然后将它们倒入燃烧管中。一边在20度－45度角范围内改变管子与水平方向的倾角，一边用拇指和食指转动管子以填实试剂。继续旋转、敲打和振动使样品从盘中扩散开来与氧化剂充分混合好。提高开口的一头使管子与水平方向成60度－70度角。在样品盘上方加上约12mm厚的CuO－Pt催化剂。轻轻敲打和振动以消除空隙。加入CuO－Pt催化剂到管顶部20mm以内，再次轻轻敲打和振动以排除空隙。$$将燃烧管安装在氮分析仪上。用数字读数计调节45%KOH溶液的弯月面到量氮计的校准标记处。记下读数计的读数R1〔读数计的读数最好在500μl和1000μl之间的某点处。如有必要，可用排气控制器来帮助达到这个计数器上的位置〕，用指定分度的温度计测量注射器的温度t1，并记录下来。转动辅助计时器到3的位置使循环的燃烧部分增加2min〔一旦这样做了以后，就会设定以后的每一个循环中增加2min的程序〕。转动燃烧循环控制钮到START位置，使分析仪进行循环操作。在循环完成以后，使燃烧循环控制钮处于STAND－BY位置。用数字读数计重新调节KOH的弯月面到校准标记处。记下新的读数R2和注射器温度t2。在不加样品的情况下按同样条件测定仪器的空白。
E 计算
E.a
记录观测的氮气体积，V0＝R2－R1，式中V0＝观测的氮体积(μl)。R1＝最初的读数，R2＝最终的读数。
E.b
测定校正的氮气体积(μl)，Vc＝V0－(Vb+Vt)，式中Vb＝空白体积(μl)，Vt＝温度t的校正体积(μl)＝Cp〔t2－t1〕，Cf由表28-1A查得〔基于最终计数器读数〕，t2和t1以K为单位。$$$T表28-1A 用于校正体积的温度校正因子(Cf)(μl/k)^^a^^$$最终计数器读数，μl/Cf，〔具有校正值的量氮计〕$$0/12$$5000/29$$10000/45$$15000/62$$20000/79$$25000/95$$30000/112$$35000/129$$40000/145$$45000/162$$50000/179$Ta.校正体积Vt＝Cf(t2－t1)
E.c
测定校正气压，Pc＝Po－(Pb+Pv)，式中Po＝观察到的气压计压力(mmHg)，Pb＝气压计温度校正〔由表28-1B查得〕，Pv＝KOH溶液蒸汽压的压力校正〔由表28-1C查得〕。
E.d
计算%N＝(Pc×Vc×0.0449)/(T×W)，式中T＝最终注射器温度，以K为单位，W＝以mg为单位的样品重量。$$$T表28-1B 气压计温度校正值(Pb)$$温度，℃/Po(mmHg)700－749/Po(mmHg)750－780$$10/1.2/1.3$$15/1.8/1.9$$20/2.3/2.5$$25/2.9/3.1$$30/3.5/3.7$$35/4.1/4.3$T$T表28-1C 用于KOH蒸气压的压力校正值(Pv)〔为了实用，KOH的温度与注射器相同〕$$温度，K/Pv，mmHg$$288/4.1$$293/5.7$$298/7.4$$303/9.6$$308/12.5$$313/16.5$T〔注：在Po处于740到780mmHg之间及注射器温度在298到305K之间时，近似的经验式(Pb+Pv)＝11.0对Po的准确度可令人满意。〕$$例如：$$Po＝750.1mmHg〔在25℃〕；W＝148.91mg$$$T /开始/完成后$$计数器读数，空白/500μl/524μl$$计数器读数，样品/524μl/6955μl$Tt1＝302.7K，t2＝303.0K，Vo＝6955－524＝6431μl$$Vc＝6431－[24+Cf(t2－t1)]＝6431－(24+35×0.3)＝6396μl$$Pc＝750.1－(3.1×9.6)＝737.4$$%N＝(737.4×6396×0.04493)/(303.0×148.91)＝4.69%
E.e
计算蛋白质%＝%N×6.25。当样品为麦粒时则为%N×5.7。
