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动物饲料中的蛋白质〔粗〕
动物饲料
- 半自动法
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A 原理
样品在250ml校准管中消化,使用台式消化器。读出流动池中氨-水杨酸盐络合物在660nm的吸光度或者将NH3蒸馏到标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴。
B 仪器
B.a 台式消化器
BD-20型或DS-20型。能保持在410℃和一次能消化20个样品,消化过程在顶部收缩的250ml校准容量管中进行。消化器的台上配备有可移动的罩,通史完全盖住管子的收缩部分或其以上的暴露部分。
B.b 自动分析仪
自动分析仪附有下列组件。带有40/h〔2:1〕偏心轮的取样器Ⅱ或取样器Ⅳ〔高比例偏心轮会导致超载和差的峰分离效果〕;比例泵Ⅲ;氨分析盘No.116-D531-01〔或按流程图构成的与之相当的多管系统〕;AAⅡ单道比色计,使用15×1.5-2mm内径的管式流动池,配以660nm干涉滤光片和稳压器,适当量筒的记录仪〔见图28-1〕。
C 试剂
C.a 磷酸盐-酒石酸盐缓冲溶液
pH14.0。溶解50g酒石酸钾钠和26.8g Na2HPO4·7H2O于600ml水中。加入54g NaOH,使之溶解。加入1ml Brij-35,用水稀至1L,混匀。
C.b 氯化钠-硫酸溶液
在2L容量瓶内溶解200g NaCl于水中,加入15ml H2SO4和2ml Brij-35。用水稀释至刻度,混匀。
C.c 次氯酸钠溶液
用水将6ml含有5.25%有效氯的市售漂白粉溶液稀释到100ml,混匀。每天需配制新鲜溶液。
C.d 硝普钠盐-水杨酸钠溶液
溶解150g的NaC7H5O3和0.3g Na2Fe(CN)5·NO·2H2O于600ml水中,加入1ml Brij-35,用水稀至1L,混匀。
C.e 氮标准溶液
称取样品〔见表28-2〕放入干燥的消化管中。每个消化管中加入9g K2SO4,0.42g HgO和15ml H2SO4〔校准过的金属勺子,可以用来移取固体〕,将消化管插入预热到410℃的消化器台上,用罩子盖住管子,消化45min。$$在消化完成后,从消化器台上取下管子的支架,放在通风橱中冷却8-10min〔所需时间根据管子周围的空气流速而定〕。向每个管子底部直接快速地洒水〔可用厨房水池中的盘碟淋洗喷头〕以完全溶解酸消化物。如果出现沉淀,将管子放在超声波浴中以促进盐的溶解。冷却,稀释至刻度,混匀。移取每个样品的一份溶液到自动分析仪的烧杯中。$$将标准溶液按浓度由小到大的顺序放在样品盘内,接着放上一组样品。测定最低浓度的标准溶液两次,舍弃第一个峰。接着进行下面每一组的样品分析,在每组样品的测定前后都以标准参考曲线校正可能的飘移。以40/h的速度和2/1的样品-淋洗液之比分析标准和样品。以第一组和第二组标准的平均峰高绘制标准曲线。以标准的平均峰高对每个250ml管内所含氮的浓度作图。$$%蛋白质=〔由图上查得的mgN/250ml×6.25×100〕/mg样品$$$T表28-2 样品重量$$蛋白质,%/样品,g$$6-24/1.5±0.1$$25-40/1.0±0.1$$41-50/0.8±0.1$$51-60/0.7±0.1$$61-90/0.5±0.01$$>90/样品重量相当于50mgN$T
C.f 氢氧化钠-硫化钾溶液
将400g NaOH溶于水中,在溶液还温热时,溶进30g K2S,稀释至1L。
D 分析系统
如果是用组装成的多管系统,应使用透明的标准泵管输送空气和溶液。接头盘管和玻璃传送管线全部用AAⅡ型号及规格。在泵后边到比色计之间,全部用玻璃输送管连接。使用AO接头,N13不锈钢螺纹接头和1/2"长,0.035"内径的Tygon管制成的改变进的AO接头,并将它装到样品稀释环上。将大约一半的N13螺纹管插进0.035"Tygon管中。Tygon管应插入AO接头的侧管中,插入足够长度,这样重复取样管就不会泵进空气。泵管间隔地通过泵的滚轮在与AO的侧管连接以前,将0.16ml/min的重复取样泵管在进口处切成小于等于1"。操作过程中,通过A10型接头的金属侧管加入缓冲溶液和次氯酸盐溶液;通过插在20T螺旋管上的金属管加入水杨酸盐溶液(d)。空气、试剂和样品在通过进样接头泵入后马上混合在一起。
E 启动
开动自动系统,除水杨酸管路外,将其它管路放入相应溶液中。5min以后,将水杨酸管路也放入相应溶液中,使系统达到平衡。如果在加入水杨酸后有沉淀形成,说明pH太低。马上关闭比例泵,用注射器以水冲洗盘管。再次启动系统之前,检查一下NaCl-H2SO4和磷酸-酒石酸盐缓冲溶液的浓度。$$连续向系统中泵入最低浓度的氮标准溶液5min以上。调节比色计上的基线控制钮到满量程的10%。连续泵入最高浓度的氮标准溶液通过系统直到不出现漂移〔通常大于等于10min〕,然后调节“标准校准”控制钮到满量程的85%。记录仪信号跟踪一定要稳,要求噪音小于0.3个小分度。如果噪音较大,应更换渗析膜。当记录仪的信号跟踪达到稳定时,马上开始进样。
F 关机
将试剂管路放在水中,首先取出水杨酸盐管路,使系统冲洗20min以上。
G 比色测定
称取样品〔见表28-2〕放入干燥的消化管中。每个消化管中加入9g K2SO4,0.42g HgO和15ml H2SO4〔校准过的金属勺子,可以用来移取固体〕,将消化管插入预热到410℃的消化器台上,用罩子盖住管子,消化45min。$$在消化完成后,从消化器台上取下管子的支架,放在通风橱中冷却8-10min〔所需时间根据管子周围的空气流速而定〕。向每个管子底部直接快速地洒水〔可用厨房水池中的盘碟淋洗喷头〕以完全溶解酸消化物。如果出现沉淀,将管子放在超声波浴中以促进盐的溶解。冷却,稀释至刻度,混匀。移取每个样品的一份溶液到自动分析仪的烧杯中。$$将标准溶液按浓度由小到大的顺序放在样品盘内,接着放上一组样品。测定最低浓度的标准溶液两次,舍弃第一个峰。接着进行下面每一组的样品分析,在每组样品的测定前后都以标准参考曲线校正可能的飘移。以40/h的速度和2/1的样品-淋洗液之比分析标准和样品。以第一组和第二组标准的平均峰高绘制标准曲线。以标准的平均峰高对每个250ml管内所含氮的浓度作图。$$%蛋白质=〔由图上查得的mgN/250ml×6.25×100〕/mg样品$$$T表28-2 样品重量$$蛋白质,%/样品,g$$6-24/1.5±0.1$$25-40/1.0±0.1$$41-50/0.8±0.1$$51-60/0.7±0.1$$61-90/0.5±0.01$$>90/样品重量相当于50mgN$T
H 滴定法测定
像G中那样消化样品,冷却5min,加入仅够溶解盐的水〔70-75ml〕。冷却,按制造厂家的说明,将消化管接到蒸馏头上。把装有25ml标准酸和5-7滴甲基红指示剂的接收瓶放在台架上。冷凝器的尖端必须插入标准酸溶液的液面以下。向管中加入50ml NaOH-K2S溶液,激烈水蒸汽蒸馏至收集到125ml蒸馏液。用0.1N NaOH标准溶液滴定剩余酸。作试剂空白校正。$$%N=[(ml标准酸×酸的当量浓度〕-〔ml标准NaOH×NaOH的当量浓度〕]×1.4007/g样品$$%粗蛋白质=%N×6.25