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动物饲料中的蛋白质〔粗〕
动物饲料
- 铜催化剂克氏法
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A 原理
样品以CuSO4为催化剂在H2SO4中消化，将氮转化成NH3，再进行蒸馏和滴定。
B 试剂
B.a 氢氧化钠
粒状、片状或比重大于等于1.36的溶液，低氮。溶解约450g NaOH于水中，冷却，稀至1L。
B.b 刚铝石
沸石，8－14目。
B.c 甲基红指示剂
溶解1g甲基红〔钠盐〕于100ml甲醇中。
B.d 盐酸或硫酸标准溶液
0.5N。
B.e 氢氧化钠标准溶液
0.1N。建议酸碱用(d)和(e)方法标定以后，再一次用其中之一检查一下另一个溶液。此外，通过分析NIST标准参考物质No.194，NH4H2PO4〔检定为12.15%氮〕和高纯赖氨酸的盐酸盐来检查整个方法。
C 仪器
C.a 消化
用容积为500－800ml的克氏瓶。
C.b 蒸馏
用橡皮塞连接到蒸馏阱的消化瓶。用低硫橡胶管将蒸馏阱与冷凝器连接，冷凝管的出口的直径应该小于4mm。
D 测定
称取0.250－1.000g样品，放入消化瓶中。加入15g K2SO4，0.04g无水CuSO4，0.5－1.0g刚铝石粒及20ml H2SO4〔如果样品重量大于1g，按每0.1g脂肪或0.2g其它有机物多加1ml的比例加入H2SO4〕。$$为检查消化参数的校正值，在每天的操作中至少包括检测一个高纯度的赖氨酸的盐酸盐样品。如果回收不完全，要进行适当的调整。$$以5min煮沸的速度加热〔灯具有预热并调节到在5min内将在25℃的250ml水烧成滚沸〕直到瓶里出现浓重的白色烟雾。轻轻转动，再继续加热90min。〔注：试剂比例，热导入和消化时间是决定性因素－不能改变〕。冷却，小心地加入250ml水冷却到室温〔注：如果在蒸馏时出现暴沸，加入水的体积要增加到275ml〕。$$在滴定烧杯中向一定量的水中加入准确测量的合适体积的标准酸溶液，使冷凝器管尖充分地浸进溶液。加入3－4滴指示剂溶液(c)。$$加入2－3滴柠檬酸三丁酯到消化瓶中以减少泡沫；再加入0.5－1.0g刚铝石粒。慢慢地沿着瓶壁，加入足量NaOH溶液(a)以使混合液呈强碱性，立刻将瓶子连接到蒸馏装置上，充分混合，以约7.5min煮沸的速度蒸馏直到在滴定烧杯中收集到150ml以上馏出液。$$用标准NaOH溶液滴定蒸馏液中剩余的标准酸，测定值用试剂空白进行校正。计算%N：$$%N＝[(N^^酸^^)(V^^酸^^)－(V^^空白^^)(N^^NaOH^^)－(V^^NaOH^^)(N^^NaOH^^)][1400.67]/mg样品$$式中V^^NaOH^^＝滴定样品所需标准碱的ml数；V^^酸^^＝测定样品中使用的标准酸的毫升数；V^^空白^^＝滴定1ml标准酸所需标准碱的毫升数减去滴定方法中带入的和蒸馏到1ml标准酸的试剂空白所需标准碱的毫升数。N^^酸^^＝标准酸的当量浓度；N^^碱^^＝标准碱的当量浓度。粗蛋白质的百分含量的计算为6.25×N%，对麦粒来说则为5.7×N%。
